大肠杆菌r基因克隆载体地构建与鉴定.pdfVIP

实用标准文案 大肠杆菌R 基因克隆载体的构建与鉴定 [摘 要]DNA 的重组与转化是分子生物学的基本实验操作。本实验可分为质粒 DNA 提取与鉴定，目的片段扩增与鉴定，DNA 重组与转化三部分。本次实验可以 全面提高学生的实验技能与逻辑思维，对于分子实验技能的培养具有重要意义。 [关键词]DNA 重组；转化；分子实验基本操作 大肠埃希氏菌是常用的实验菌种，其质粒R-pGEX-4T-1 为人工设计，已加 R 目的基因片段。现需要将R 基因转到pMD18-T Simple Vector载体质粒上，并 将目标质粒转化入大肠杆菌感受态细胞，并检验转化效率。 1 材料与方法 1.1 材 料 1.1.1 菌株及质粒 E. coli DH5 α；R-pGEX-4T-1 质粒；pMD 18- 载体。 1.1.2 主要试剂和仪器 溶液Ⅰ，溶液Ⅱ，溶液Ⅲ，TE 缓冲液，0.5M EDTA， 5*TBE，氯仿:异戊醇（V:V，24:1），70%乙醇，50mg/mL Carb，10*loading-buffer， 2.5mmol/L dNTP 混合物，Taq 酶，DNA 模板，引物对，10*PCR buffer，50*TAE， 0.1M CaCl 溶液，LB 固体/液体培养基，5 mg/ml Tet，34 mg/ml Cam