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Chapter 4 Light Microscope and Organic Fluorescence Probes;History of microscope;Significance of Microscope;The Theory of Magnification of Lens;Light Microscope, Magnification;三透镜,
放大倍数提高,像更明亮,不需要大的目镜;The constructure of the general light microscope(复式显微镜);16,17世纪
科学家的素养,胡克定律;Electron Microscope:
Transmission Electron Microscope (TEM)
Scanning Electron Microscope (SEM)
Analytical Electron Microscope (AEM)
Scanning Tunneling Microscope (STM)
Atomic Force Microscope (AFM);Bright Field Light Microscope
(disadvantage)
Contrast can be dramatically improved using modifications such as phase contrast, differential interference contrast, dark field, Fluorescence, confocal, inverted, Two-photon and so on microscopes are specialized instruments, used for research, clinical, and industrial applications.
;What is fluorescence? ;Fluorescence Microscope;Common light microscope;;;荧光显微镜对于组织和细胞分析至关重要；
荧光探针对荧光显微镜发挥其功能至关重要。;荧光探针（Fluorescence probes）;Organic fluorescence probes (p110) （Where is fluorescence from? 荧光来自何处？）;Cyanine dyes （菁染料）;Photoluminescence of Cyanine dyes;400;The bioapplications of Organic fluorescence probes;The classification of the work principle of organic fluorescence probes;1. 配体识别 detecting cations;Na+、 K+;Na+;Ca2+, the design and enhancement of probe p114;;2. Fluorescence probes based on chemical reaction;单线态氧 （p123）;3. Fluorescence probes based on FRET;;4.3 Green fluorescent protein p131 ;下村修和他的同事发现水母素发出的蓝色冷光(λemmax = 470nm)与GFP激发光谱的波长(λexmax = 460nm)相匹配,而GFP发射光谱的波长大约510nm (λemmax: 508～515nm) 。Aequorea victoria发出绿光的机理:首先直接由水母素内的化学反应激发电子，然后进行无辐射能量转移,以激发GFP内的电子,然后使电子在返回基态时发出绿光。这是物理化学中已知的荧光共振能量转移( FRET)在生物体系中的体现。;GFP折叠成为近似天然构象（前提），然后Gly67的酰胺亲核进攻Ser65的羧基，接着环化和脱水形成咪唑啉酮（无荧光），最后分子氧使Tyr66的α,β-键脱氢，从而使它的芳基和咪唑啉酮共轭(对羟基亚苄基咪唑啉酮)。只有在这个阶段，发色团（Chromophore）才能吸收可见光并发出???光。;P136
作为标记物具有以下特点：荧光强、检测非常方便；而且荧光非常稳定，可以承受诸如热、碱性pH、长时间光照、有机试剂和很多生物梅等因素的影响；最要的是它的荧光团是分子内自催化形成的，不需要其他辅助因子和反应底物的参与。
缺点：荧光团形成较慢，需要氧分子的辅助，并且在低浓度时很容易受到生物休系背景荧光的于扰；另外与小分子探针相比，它的体积过大，在某些研究中对体系的干扰很大。从而限制了它的应用。;Th
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