沙棘籽提取物配方制剂的毒理性分析.doc

沙棘籽提取物配方制剂的毒理性分析 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：沙棘籽提取物配方制剂的毒理性分析 1 1、 材料与方法 2 2、 结果 5 3、 讨论 7 文2：劳动合同法的理性分析 8 1、限制了企业的用工自由； 9 参考文摘引言： 14 原创性声明（模板） 15 文章致谢（模板） 15 正文 沙棘籽提取物配方制剂的毒理性分析 文1：沙棘籽提取物配方制剂的毒理性分析 沙棘 (Hippophae rhamnoides Linn.) 为蔷薇目胡颓子科沙棘属灌木， 我国三北高原大面积种植， 其根系发达， 可以防风固沙。沙棘也是一种药食同源性植物， 根茎、枝叶、果实、种子等都有营养和药用成分。沙棘果实具有利肺止咳、活血散瘀的功效， 沙棘叶是家畜的优良牧草， 沙棘籽经过超临界萃取或亚临界低温萃取可以得到沙棘籽油。沙棘果油和沙棘籽油具有抗衰老、抗溃疡、治疗烧伤、治疗妇科疾病以及抗辐射、抗肿瘤等多种功效， 作为保健食品原料已经得到广泛应用[1]， 沙棘籽渣为沙棘籽榨油后的残渣， 目前多用于饲料。研究表明， 沙棘籽中的大部分生物活性物质在提油之后仍遗留在油渣中， 沙棘籽渣含有丰富的蛋白质、糖类和可食纤维素等多种营养成分以及酚性、鞣质、甾体、萜类、黄酮及其苷类等多种生物活性成分[2]。探索沙棘籽渣提取物的食用价值， 有利于提高沙棘资源的利用率。本文对配方沙棘籽提取物进行急性毒性、遗传毒性和30天经口毒性试验， 为其开发利用提供科学依据。 1、 材料与方法 、 配方沙棘籽提取物 配方沙棘籽提取物由北京某健康产业有限公司提供。将沙棘籽脱脂后， 经过提取、浓缩、干燥得到粉状物， 再与沙棘籽油和沙棘果油进行组方， 使用蜂蜡混悬， 得到均匀的油粉混悬液。其中沙棘籽提取物25%～30%、沙棘籽油30%～35%、沙棘果油30%～35%， 蜂蜡5%～10%。主要有效成分沙棘原花青素含量为6 g/100 g， 维生素E 60 mg/100 g。人群推荐摄入量为 g/d， 产品密度为 g/mL。 、 仪器和试剂 CX21型正置显微镜 (日本奥林巴斯株式会社) ， MEK-6318K型自动血球计数仪 (日本光电工业株式会社) ， 7020型全自动生化分析仪 (日本日立高新技术株式会社) ， 鼠伤寒沙门菌组氨酸缺陷型TA97a、TA98、TA100、TA102和TA1535菌株 (美国moltox公司) 。生化检测试剂为上海丰汇生物医药有限公司提供。环磷酰胺由江苏恒瑞医药股份有限公司提供。 、 实验动物 SPF级昆明种小鼠和4周龄Wistar大鼠， 均购自湖北省实验动物研究中心， 生产许可证号SCXK (鄂) 2015-0018。饲养于湖北省食品药品安全评价中心SPF级屏障动物房， 使用许可证号SYXK (鄂) 2012-0065。动物适应性喂养3 d， 检疫合格后使用。 、 小鼠急性毒性试验 小鼠20只， 雌雄各半， 体重～ g， 禁食16 h后按20 mL/kg单次灌胃配方沙棘籽提取物 g/kg， 相当于人群推荐日摄入量的倍， 连续观察14 d。 、 小鼠骨髓细胞微核试验[3] 小鼠雌雄各25只， 体重～ g。按体重随机分为5组， 每组10只， 阴性对照组灌胃大豆油， 阳性对照组灌胃环磷酰胺40 mg/kg， 配方沙棘籽提取物低、中、高剂量组灌胃剂量分别为、 g/kg。采用30 h给药法， 即动物第一次灌胃后， 间隔24 h再第二次给予受试物， 再间隔6 h处死动物。取动物股骨骨髓液， 与适量小牛血清混匀， 常规涂片， 自然干燥后放入甲醇中固定5～10 min， Giemsa染色。在油镜下观察， 计数每只动物嗜多染红细胞和成熟红细胞的比例， 并观察含有微核的嗜多染红细胞数， 微核率以千分率表示。 、 Ames试验[3] 采用鼠伤寒沙门菌TA97a、 TA98、TA100、TA102四株试验菌株， 在加与不加S9 (代谢活化系统) 时， 观察8、40、200、1000和5000 μg/皿 5个剂量组对测试菌株的抑菌作用。实验同时设3个对照组， 分别为自发回变对照、溶媒对照和阳性对照。各菌株及各对照组在每一浓度均做3个平皿作为平行对照， 以上各皿在顶层琼脂中加入 mL试验菌株增菌液、 mL受试物溶液和 mL肝匀浆S9混合液 (当需要代谢活化时) ， 混匀后倒入底层培养基平板上。37 ℃培养48 h， 计数每皿回变菌落数。如果受试物的回变菌落数是自发回变组菌落数2倍以上， 并具有剂量-反应关系者则定为阳性。 、 小鼠精子畸形试验[3] 雄性小鼠25只， 体重～ g， 按体重随机分为5组， 每组5只。分组及剂量同节， 持续给药5 d， 第35天用颈椎脱臼法处死小鼠，