五味灵芪胶囊体外抗艾滋病毒活性的分析.docVIP

五味灵芪胶囊体外抗艾滋病毒活性的分析 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：五味灵芪胶囊体外抗艾滋病毒活性的分析 1 1 材料与方法 2 2 实验设计 4 五味灵芪胶囊体外抑制HIV-1复制的研究 4 五味灵芪胶囊体外毒性测定 5 五味灵芪胶囊对淋巴细胞增生活性的研究 6 五味灵芪胶囊对干扰素-γ产生细胞数目的研究 6 3 结果 7 4 讨论 7 文2：紫玉盘提取物体外抗肿瘤活性的实验研究 9 1材料与仪器 10 参考文摘引言： 13 原创性声明（模板） 14 文章致谢（模板） 14 正文 五味灵芪胶囊体外抗艾滋病毒活性的分析 文1：五味灵芪胶囊体外抗艾滋病毒活性的分析 Key words：HIV-1；Wuweilingqi capsule；AZT；inhibited activity；immune activity 近十几年内，全球的科学家对中医药抗艾滋病毒(HIV-1)的活性进行了深入的研究，也确实发现中药复方(如小柴胡汤)、单味中药(如紫草、黄连)、中药提取物(如甘草甜素)及从中药中提取的纯化合物(如黄芩苷)具有抑制HIV-1复制的活性，而且有的还表现出增强免疫功能的活性，但最终至今没有一个制品被国际承认和用于临床治疗[1-2]。其原因很复杂，仅体外评价就涉及检测方法不规范，治疗指数低，免疫指标缺乏特异性及质量控制难等问题。 从多个中药复方制剂中经分离、提取几个不同部位的制品，经过初步的检测及筛选，确定五味灵芪胶囊具有较稳定的活性。在此基础上，我们系统科学地设计了实验，检测了五味灵芪胶囊在不同的细胞系培养中对不同病毒株的抑制活性，并确定了五味灵芪胶囊与目前已知的几类抗HIV-1药物的协同作用。此外，我们也检测了五味灵芪胶囊对限制HIV-1复制的特异性免疫反应的影响。 1 材料与方法 病毒 HIV-1018a是齐夫多定(AZT)敏感的临床分离株，HIV- 1018c是AZT耐受的临床分离株，这两种毒株由美国加州大学圣地亚哥分校的Douglas Richmen教授提供。HTLV-ⅢB是HIV-1实验室株，由美国巴尔的摩人类病毒研究所的教授提供。 细胞 人外周血单核细胞(PBMC)：使用Ficoll Hypaque(美国密苏里州圣路易斯Sigma 公司)密度梯度离心方法，从未感染HIV的健康供血者的外周血分离得来。H9、MT-2 细胞：是传代人T淋巴细胞系，其中H9细胞由教授提供。MT-2细胞和HTLV-ⅢB慢性感染的H9细胞(H9/HTLV-ⅢB)来自美国科罗拉多医学中心。 培养基 带有20%胎牛血清及5%白细胞介素-2(IL-2，美国马里兰州哥伦比亚的Hemagen的细胞产品)的RPMI 1640称为R-3培养基，用于抗HIV-1活性及协同活性的PBMC实验中。新分离的PBMC 需要预先用含有3 μg/mL的植物血凝素(PHA，美国密苏里州圣路易斯Sigma公司产品)孵化48 h，之后用PBS洗1次，悬浮在R-3培养基中待用。带有10%人AB血清的RPMI 1640培养基和AIM-V培养基分别用于淋巴细胞增生实验和酶联免疫-斑点(ELISPOT)实验。带有10%胎牛血清的RPMI 1640称为R-10培养基，用于H9和MT-2的实验。 药物 五味灵芪胶囊由海南亚洲制药有限公司分离，水溶。实验中溶于相应的培养基中，原始浓度为1 mg/mL。 HIV-1 p24抗原产量的测定 HIV-1 p24抗原产量的定量测定使用全病毒抗原俘获的酶联免疫(ELISA)方法，试剂盒为美国佛州 Hialeah Coulter 公司产品，检测程序参看说明书。 细胞毒性的测定 用3H-胸腺嘧啶掺入决定药物对细胞增殖的影响，再与细胞对照孔相比较，判断药物的毒性。3H-胸腺嘧啶购自美国麻省波士顿杜邦公司。 淋巴细胞增生的测定 PBMC对特异性或非特异性抗原的增生反应能力由3H-胸腺嘧啶掺入量决定。 激活指数(SI)＝实验组CPM平均值/对照组CPM平均值 干扰素-γ产生细胞的测定 使用酶联免疫斑点(enzyme-Linked Immuno Spot，ELISPOT)测定方法确定干扰素-γ产生细胞的数目。试剂盒为美国俄亥俄州Mabtech公司的产品。 数据处理 50%抑制浓度(IC50)、50%毒性浓度(TC50)、联合指数(CI)由Chou Dose Effect Program软件计算决定。 治疗指数(TI)＝TC50/IC50 2 实验设计 五味灵芪胶囊体外抑制HIV-1复制的研究 用HIV-1018a、HIV-1018c或HTLV-ⅢB感染PBMC，H9细胞或MT-2细胞，攻击强度为每106 PBMC/100