一种制备靶点特异性NK细胞的方法及其应用发明专利.pdfVIP

一种制备靶点特异性NK细胞的方法及其应用 技术领域 本发明属于医学生物工程技术领域，涉及一种CAR-NK 细胞的制备方法及其 NK NK 应用，尤其涉及一种活性增强型 细胞的制备方法、活性增强型 细胞用于 CAR-NK 制备方法及其制备得到的靶点特异性CAR-NK 细胞。 背景技术 自然杀伤(NK)细胞是机体重要的免疫细胞，在外周血单个核细胞组成中占 10％左右，是人体抗肿瘤、抗病原体感染的第一道防线。无需预先致敏或免疫接 NK 种， 细胞便可以对肿瘤细胞表现出强烈的细胞毒活性，并产生许多细胞因子， / MHC T 激活适应性免疫系统。肿瘤经常以丢失肿瘤相关抗原和或 分子作为逃逸 NK MHC 细胞免疫监控的手段。 细胞可以以非 限制的方式裂解肿瘤细胞，而且 NK 无需肿瘤细胞表达相关抗原，因此， 细胞被认为是过继性癌症免疫治疗的理 NK 想选择。在临床上， 细胞的免疫治疗已被推荐用于治疗改善血液恶性肿瘤和 Miller NK 实体瘤。 等人率先开展了 细胞治疗癌症的临床研究，并取得了不错的 NK 疗效。 细胞还在机体抗病毒免疫反应中也发挥着至关重要的作用，它既能直 接杀伤病毒感染细胞，又具有强大的免疫调节功能，在新冠肺炎治疗中具有较大 NK 潜力。不仅如此， 细胞可以还直接清除衰老细胞，同时活化吞噬细胞，增加 它对衰老细胞的清理能力，从而达到延缓衰老、保持年轻态的目的。 NK 目前，用于 过继性细胞免疫疗法需要很高的细胞剂量和多次回输，而 NK NK 细胞免疫治疗的一个阻碍是难以生产大量功能完全的 细胞，同时缺少体 NK OKT3 T 外扩增 细胞的标准方法。与采用 抗体便可激活并扩增 细胞相比， NK 细胞对于类似刺激的反应较为温和、无法持续增殖。因此，为了克服这个障 NK 碍，研究人员正在开发一些新的方法来获得更多、更纯的 细胞。 NK 目前常用的 细胞的制备方法包括血液细胞分离法、细胞因子或化学药品 刺激法和饲养细胞法。血液细胞分离法是获得患者体内大量的淋巴细胞，去除B T CD56 NK 细胞和 细胞后，分选 阳性细胞，用特定细胞因子激活 细胞，再将其 回输患者体内；该方法的缺陷是需要大量患者的淋巴细胞进行分选，成本高，数 量无法满足临床上对于多次回输的需求。细胞因子或化学药品刺激法是将患者体 4 10 NK 内获得的大量的淋巴细胞与细胞因子共培养 ～ 周，获得 细胞，细胞因子 NK IL-2 IL-12 IL-15 IL-18 IL-21 在调节 细胞的活性方面具有重要作用， 、 、 、 、 IFN-γ NK