动物细胞培养所需的基本条件.pptxVIP

动物细胞培育所需的基本条件;一、动物细胞的培育 器材的清洗和消毒 ⑴器材的清洗 浸泡、刷洗、泡酸、冲洗 ⑵器材的消毒灭菌 物理消毒 化学消毒;动物细胞培育基的组成和制备;;BSS的用途;BSS的配制;动物细胞的培育基的种类和组成;;;血清的生物功能;;;;;合成培育基;;⑴氨基酸：培育基供给必需的12种氨基酸 ⑵维生素：B族维生素 ⑶糖类：大多以葡萄糖为碳源 ⑷无机盐 ⑸其它成分：嘌呤，嘧啶以及抗氧化剂;⒊无血清培育基 ①提高重复性 ②削减微生物污染 ③供给足够稳定 ④产品易纯化 ⑤避开血清因素对细胞的毒性 ⑥削减血清中蛋白对生物测定的干扰;;无血清培育基加入添加剂 ⑴生长因子和激素 ⑵结合蛋白：转铁蛋白和白蛋白 ⑶贴附因子和伸展因子 ⑷有利细胞生长的因子和元素;获得细胞;动物细胞培育所需的基本条件;;;第十二章 动物细胞培育技术;原代培育;取材;;;解离释放细胞;;消化法; 消化液 胰蛋白酶溶液 主要作用是使细胞间的蛋白质水解，从而使贴壁细胞从瓶壁上脱落并使细胞游离分散开来 常用浓度为0.25%或5%胰蛋白酶。;;胰蛋白酶消化法;胰蛋白酶消化法;机械法;原代培育常用方法;;组织块培育法;;动物细胞的原代培育;细胞培育的试验用品 ;细胞培育板 ?6孔， 12孔， 24孔， 48孔 96孔;细胞培育皿 ?35mm ?60mm? 100mm?;冻存管 1.2ml 2ml， 5ml;超净工作台与生物平安柜;;;无菌室;液氮罐;液氮罐;着装;操作者进入无菌室前先用肥皂洗净双手，然后用1‰ 新洁尔灭浸泡消毒5分钟;将小白鼠断颈处死，然后用75%酒精或1‰ 新洁尔灭浸泡消毒，快速进入无菌室。 ;将小白鼠置超净工作台上，翻开腹腔 ;用眼科剪和镊，将肾外膜剪破，并将其剥向肾门，去肾外膜及脂肪。;剪碎组织;接种组织块;移入培育箱中（留意贴有组织块的一面朝上），;视察;;单层细胞培育法;单层细胞培育法;悬浮细胞培育法;传代培育;动物细胞生长特性：;;贴壁生长细胞传代;半悬浮生长细胞传代;悬浮生长细胞传代;动物胚胎或幼龄动物的组织、器官;动物细胞培育;细胞系与细胞克隆;　　细胞株：传代培育的细胞一般传至10代左右细胞生长停滞，大局部细胞苍老死亡，少数细胞存活到40~50代，这种传代细胞为细胞株。 ;细胞克隆技术;细胞克隆技术;克隆的分别;感谢欣赏