固相萃取UPLCMSMS法测定食品中黑豆红含量.docVIP

固相萃取UPLCMSMS法测定食品中黑豆红含量 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：固相萃取UPLCMSMS法测定食品中黑豆红含量 1 1、材料与方法 2 2、结果与讨论 4 3、结论 7 文2：HPLC法测定中保心宁颗粒中丹参素的含量 7 1 仪器与试剂 8 2 方法与结果 8 3 讨论 10 参考文摘引言： 10 原创性声明（模板） 11 文章致谢（模板） 12 正文 固相萃取UPLCMSMS法测定食品中黑豆红含量 文1：固相萃取UPLCMSMS法测定食品中黑豆红含量 黑豆红色素是以黑豆种皮为原料提取的天然色素，为类黄酮类化合物，属于花青素苷类色素，包括矢车菊素-3-葡萄糖苷、飞燕草素-3-葡萄糖苷、矢车菊素-3-半乳糖苷，其中主要成分是矢车菊素-3-半乳糖苷，是一种很有应用价值的天然色素[1，2]。我国现行的国家标准GB2760-2014《食品安全国家标准食品添加剂使用标准》中规定黑豆红可用于果蔬汁（浆）类饮料、风味饮料（仅限果味饮料）、配制酒、糖果、糕点上彩装等产品，在这些产品中最大使用量均为/kg[3] 黑豆红和其他种类的花青素性质相似，容易受到光、酸碱性、金属等影响，pH值越高越不稳定，具有一定的耐热性[4，5]，而关于矢车菊素-3-半乳糖苷的检测方法，目前常用的有pH示差法、紫外-可见分光光度法[6]、高效液相色谱法[7，8，9]和超高效液相色谱-电喷雾串联质谱法[10，11]；其中超高效液相色谱-电喷雾串联质谱法比其他方法在快速分离、准确性、选择性和灵敏度等方面更具有优势[12]。而利用固相萃取小柱能够对目标分析物进行富集、净化、洗脱，达到富集去干扰的净化效果。因此采用固相萃取-UPLC/MS/MS法可以对食品中黑豆红含量进行定性定量分析。 1、材料与方法 仪器与试剂 Agilent1290-6460超高效液相色谱-三重四极杆液质联用仪，配有JetstreamESI源（美国Agilent公司）、电子天平（梅特勒托利多）、固相萃取装置（美国milli公司）、氮吹仪（北京康林）、高速离心机（湖南湘仪）、超纯水机（湖南科尔顿）、黑豆红标准品（TorontoResearchChemicals）、甲醇（HPLC级，DIKMA）、甲酸（HPLC级，DIKMA）、聚酰胺固相萃取小柱（poly-seryPA1g/6mL上海安谱）；实验室用水均来自一级水系统。 试剂与标准溶液配制 %甲酸水溶液：取甲酸于250mL容量瓶中，加纯水至刻度，经μm滤膜过滤。 %甲酸水溶液：取甲酸于500mL容量瓶中，加纯水至刻度。 %甲酸甲醇溶液：取甲酸于100mL容量瓶中，加甲醇至刻度。 黑豆红标准储备液配制：准确称取黑豆红标准品（精确至）于10mL棕色容量瓶中，用%甲酸甲醇溶解并定容至刻度，配制成200μg/mL标准储备液，保存于-18℃冰箱中。 黑豆红标准工作液配制：分别准确吸取黑豆红标准储备液0μL、μL、25μL、125μL、250μL、500μL、1000μL、2500μL于8个5mL棕色容量瓶中，并用%甲酸甲醇定容至刻度。配制成浓度分别为0μg/mL、μg/mL、μg/mL、μg/mL、μg/mL、μg/mL、μg/mL、μg/mL标准溶液工作液。黑豆红标准溶液TIC图见图1。 图1浓度为μg/mL黑豆红标准溶液TIC图 仪器条件 流动相A:%甲酸溶液；流动相B：甲醇；色谱柱：μm*50mm*流速：/min进样量：2μL、柱温：30℃。梯度洗脱条件见表1。 离子源：JetstreamESI源，正离子模式，多反应监测扫描方式（MRM）；干燥气温度：325℃；干燥气流速：12L/min；雾化气压力：35psi；鞘气温度：400℃；鞘气流速：12L/min；毛细管电压：4000V；多反应监测模式MRM参数见表2。 表1梯度洗脱 表2黑豆红MRM参数 备注：带*号为定量离子 实验方法 .1果味饮料 准确称取（精确至）样品于烧杯中，（碳酸型果味饮料需先经超声波振荡5min，以去除CO2），用甲酸调节其pH=3，待用。 .2果蔬汁饮料 准确称取（精确至）样品于离心管中，用甲酸调节其pH=3，必要时可经过10000min离心10min，取上清液待用。 .3糖果 经研钵研磨粉碎后，准确称取（精确至）样品于烧杯中，加纯水20mL，经50℃水浴温热搅拌溶解后，放冷，用甲酸调节其pH=3，转移并定容至25mL，摇匀后，取2mL待用。 .4配制酒 准确称取（精确至）样品于烧杯中，经50℃水浴以去除酒精含量，放冷，用甲酸调节其pH=3，待用。 依次用5mL甲醇、5mL纯水、%甲酸-水活化聚酰胺小柱，取上述提取液上样，缓慢过柱，接着用%甲酸-水分两次淋洗