微生物的实验室培养 (7).pptVIP

1.无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外，还有什么目的？ 2.请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如果需要，请选择合适的方法。 （1） 培养细菌用的培养基与培养皿 （2） 玻棒、试管、烧瓶和吸管 （3） 实验操作者的双手 答：无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。 答：（1）、（2）需要灭菌；（3）需要消毒。 旁栏思考 第27页，共60页，编辑于2022年，星期日 微生物实验室培养的基本操作程序 1、器具的灭菌 2、培养基的配制 3、培养基的灭菌 4、倒平板 5、微生物接种 6、恒温箱中培养 7、菌种的保存 第28页，共60页，编辑于2022年，星期日 三.大肠杆菌的纯化培养： ㈠制备牛肉膏蛋白胨固体培养基（用于细菌培养） 1.计算： 依配方计算各成分的用量 2.称量： 3.溶化： 牛肉膏黏稠，用称量纸称取 牛肉膏、蛋白胨易吸潮，要快 牛肉膏、称量纸 、少量水加热溶解 →取纸 →蛋白胨、NaCl →琼脂 →补水定容（容量瓶中） 4.调pH、 分散成单个细胞, 形成单个菌落 6.分装、（将培养基由容量瓶转入锥形瓶） 7.加塞、包扎： 第29页，共60页，编辑于2022年，星期日 8．灭菌: 将将装有培养基的锥形瓶放入高压蒸气灭菌锅，在压力为100kPa、温度为121℃，灭菌15～30min。 将培养皿用牛皮纸包裹，放入干热灭菌箱内，在160～170 ℃下灭菌2h。 9．倒平板: 待培养基冷却到50 ℃左右时，在酒精灯附近倒平板。（倒平板操作见课本）2d后观察平板，无杂菌污染才可用来接种. 第30页，共60页，编辑于2022年，星期日 9．倒平板: 待培养基冷却到50 ℃左右时，在酒精灯附近倒平板。（倒平板操作见课本）2d后观察平板，无杂菌污染才可用来接种. 10．无菌检查： 将灭菌的培养基放入37℃的温室中培养24—48小时，以检查灭菌是否彻底。 第31页，共60页，编辑于2022年，星期日 10．无菌检查： 将灭菌的培养基放入37℃的温室中培养24—48小时，以检查灭菌是否彻底。 第32页，共60页，编辑于2022年，星期日 1.培养基灭菌后，需要冷却到50 ℃左右时，才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？ 问题讨论 答：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。 2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？ 答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。 第33页，共60页，编辑于2022年，星期日 3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？ 4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？为什么？ 答：平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，将平板倒置，可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。 答：空气中的微生物可能在皿盖与皿底之间的培养基上滋生，因此最好不要用这个平板培养微生物。 第34页，共60页，编辑于2022年，星期日 （二）纯化大肠杆菌 常用的微生物接种方法： 1.平板划线法 2.稀释涂布平板法 三.大肠杆菌的纯化培养： （一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基（用于细菌培养） 第35页，共60页，编辑于2022年，星期日 二.大肠杆菌的纯化培养： ㈠制备牛肉膏蛋白胨固体培养基 ㈡纯化大肠杆菌： ⑴平板划线法： 1.接种： 第36页，共60页，编辑于2022年，星期日 第37页，共60页，编辑于2022年，星期日 一旦划破，会造成划线不均匀，难以达到分离单菌落的目的； 二是存留在划破处的单个细胞无法形成规矩的菌落，菌落会沿着划破处生长，会形成一个条状的菌落。 第38页，共60页，编辑于2022年，星期日 划3个平板 1个不划线 （重复实验） （空白对照） 第39页，共60页，编辑于2022年，星期日 1.接种环只蘸一次菌液,但要在培养基不同位置连续划线多次. 2.划线首尾不能相接 3.划线后,培养皿倒置培养 划线分离法注意事项: 第40页，共60页，编辑于2022年，星期日 问题讨论 为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？ 操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物 杀死上次残留的菌种，保证使下一次划线时，菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。 及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感染操作者。 第41页，共60页，编辑于2022年，星期日 2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷