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鼻息肉免疫调节中树突状细胞的作用机制观察分析 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：鼻息肉免疫调节中树突状细胞的作用机制观察分析 1 1、资料与方法 2 2、结果 4 3、讨论 5 文2：肾肿瘤中浸润性树突状细胞的免疫状态变化 7 1 材料与方法 7 2 结 果 9 3 讨 论 10 参考文摘引言： 11 原创性声明（模板） 13 文章致谢（模板） 14 正文 鼻息肉免疫调节中树突状细胞的作用机制观察分析 文1：鼻息肉免疫调节中树突状细胞的作用机制观察分析 慢性鼻窦炎是一种异质性疾病，其特征是上呼吸道和鼻窦局部发炎，持续至少12周[1，2]。根据组织学和体格检查，慢性鼻窦炎通常分为两类：带有息肉的慢性鼻窦炎（chronic rhinosinusitis with nasal polyps，CwNP）和不带息肉的慢性鼻窦炎（Chronicrhinosinusitis without nasal polyps，C NP)[3]。C NP具有1型炎症的特征[4]。对CwNP中的炎症进行了深入研究显示2型炎症和鼻息肉中的嗜酸性粒细胞增多。嗜酸性鼻息肉中的炎症主要由2型细胞因子IL-5和IL-13控制，IL-4和IL-13可由Th2细胞免疫细胞产生[5]。IL-5强烈诱导嗜酸性粒细胞增多。IL-13激活巨噬细胞、B细胞和上皮细胞，诱导嗜酸性粒细胞和Th2细胞的募集，IgE介导的反应和重塑[6]。CwNP与鼻塞和嗅觉丧失的临床主诉密切相关，其特征在于嗜酸性粒细胞增多和Th2相关的炎症[7]。尚未确定CwNP中Th2相关炎症扩增的基础机制。树突状细胞是主要的专业抗原呈递细胞，通过连接先天性和适应性免疫应答，在宿主免疫中发挥关键作用[8]。树突状细胞是许多炎症性疾病的关键调节剂，包括特应性皮炎和哮喘[9]。本研究中旨在探究树突状细胞在鼻息肉免疫调节中的作用机制。 1、资料与方法 临床资料 选择2017年1月至2019年10月华中科技大学协和江北医院从过敏免疫诊所、耳鼻喉科诊所和鼻窦中心招募带有鼻息肉的慢性鼻窦炎患者304例。根据治疗方式分为三组：对照组（鼻中隔手术的104例患者的正常中鼻甲黏膜组织），其中，男56例，女48例，平均年龄（±）岁；鼻息肉组（100例鼻息肉患者治疗前的患者），其中，男52例，女48例，平均年龄（±）岁；糖皮质激素组（100例鼻息肉患者糖皮质激素治疗7d），其中，男50例，女40例，平均年龄（±）岁，组间差异无显著性（P），具有可比性。纳入标准：(1)所有受试者均符合美国耳鼻咽喉科—头颈外科慢性鼻窦炎工作队所定义的慢性鼻窦炎标准[3];(2)年龄20～65岁，性别不限；(3)临床资料完整。排除标准：具有确定的免疫缺陷、妊娠、凝血功能障碍或诊断为典型的过敏性真菌鼻窦炎，Churg-Strauss综合征或囊性纤维化；有严重躯体疾病；合并恶性肿瘤；严重精神类疾病。所有受试者均签署了知情同意书，并且该研究得到本院伦理审查委员会的批准。糖皮质激素治疗措施：术前1周给予泼尼松每日30mg，口服，术日早晨肌内注射地塞米松10mg，术后仍予泼尼松30mg/d，维持1周，再改用鼻内糖皮质激素，视情况应用4～12周。 方法 鼻组织脱水，石蜡包埋，3%H2O2/甲醇封闭内源性过氧化物酶活性，用5%马血清/磷酸缓冲盐溶液阻断组织切片，抗生物素蛋白/生物素阻断试剂盒处理。将玻片与10μg/ml小鼠抗人CD1c mAb在封闭缓冲液中于4℃孵育过夜。一抗处理后与生物素化的马抗小鼠IgG在室温下孵育1h，ABC试剂（抗生物素蛋白—生物素-HRP复合物）孵育1h，DAB试剂中室温孵育5min。去离子水冲洗，用苏木精复染、脱水、清洗，显微镜下计数鼻黏膜中阳性细胞数量。 通过用Rhinoprobe刮宫术从鼻息肉收集鼻上皮刮屑，使用QIAzol从鼻窦组织中提取总RNA，并根据制造商的说明使用Nucleospin RNAⅡ试剂盒清洗并用DNase I处理。用SupecriptⅡ反转录酶和随机引物合成单链c DNA。使用TaqMan方法在Applied Biosystems 7500序列检测系统上以15μl反应进行半定量实时反转录聚合酶链式反应技术。10 ng总RNA的cDNA等分试样用于实时反转录聚合酶链式反应技术，将m RNA表达标准化为管家基因β-葡萄糖醛酸苷酶的中值表达。 称重样品后打碎，与30μg/ml DNase I和1 mg/ml I型胶原酶在4℃下孵育过夜，70μm尼龙网过滤细胞。红细胞裂解液处理后杜氏磷酸缓冲液洗涤，计数和染色以进行流式细胞术分析。 统计学处理 采用SPSS 统计分析软件处理；计量资料采用“均数±标准差”表示，组间比较