肥胖大鼠肠道Toll样受体4和核转录因子kappaB受电针的影响分析.docVIP

肥胖大鼠肠道Toll样受体4和核转录因子kappaB受电针的影响分析 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：肥胖大鼠肠道Toll样受体4和核转录因子kappaB受电针的影响分析 1 1、材料与方法 2 2、结果 6 3、讨论 8 文2：核转录因子κB与脑缺血再灌注损伤 10 1 NFκB的生物学特性 11 2 NFκB和CIRINF 13 3 Bcl2、Bax与CIRICIRI 14 4 NFκB与Bcl2、BaxBcl2 15 5 结语 16 参考文摘引言： 16 原创性声明（模板） 18 文章致谢（模板） 18 正文 肥胖大鼠肠道Toll样受体4和核转录因子kappaB受电针的影响分析 文1：肥胖大鼠肠道Toll样受体4和核转录因子kappaB受电针的影响分析 能量摄入与消耗失衡是导致肥胖的重要原因，而肥胖作为2型糖尿病、心血管疾病、中风和癌症等致死性疾病的高危因素，已成为威胁全球健康的公共卫生问题[1]。胃肠道是最先接触营养物质的组织，高脂饮食导致的肠道稳态失衡，包括肠道上皮屏障和菌落改变、肠肽分泌异常等，是导致巨噬细胞激活，进而产生肠道炎性反应及系统性炎性反应的基石，与肥胖和糖尿病等代谢性疾病的发生发展密切相关[2] Toll样受体4(Toll-likereceptor， TLR4)被认为是识别肠道炎性反应的第一道屏障，它通过激活髓样分化因子而使白细胞介素-1受体相关激酶和肿瘤坏死因子受体相关蛋白6磷酸化，该信号转导至下游核因子κB抑制蛋白(IκB)激酶复合物，导致IκB-α磷酸化降解，从而激活核转录因子(nuclear factor-kappa B，NF-κB)，在炎性反应介质表达中发挥关键作用[3]。在NF-κB的5个亚基p50/p105、p52/p100、p65/RelA、cRel和RelB中，p65/RelA被普遍认为在NF-κB的转录功能中发挥重要作用，且TLR4的激活也是肠道免疫反应引发肥胖和胰岛素抵抗的关键环节[4]。TLR4与NF-κB表达增加又可加重内毒素血症，而内毒素血症是肥胖机体长期慢性低水平炎性反应的重要诱发因素。由此可见，TLR4是肠道免疫与肥胖的重要关联靶点。针灸对肥胖具有良性调节作用，其机制包括促进消化、减轻氧化应激、调节代谢和炎性反应等[5，6]，但针灸是否对肥胖机体的肠道稳态发挥调节作用，目前报道较少。本实验基于TLR4在肠道免疫中的重要作用及其在肥胖发生中的重要地位，以肠道TLR4和NF-κB为切入点，探讨电针改善肥胖状态的潜在机制，以期为阐明针灸防治肥胖的作用机制提供新思路。 1、材料与方法 实验动物 SPF级健康雄性7周龄Wistar大鼠50只，体质量160～200 g，由湖北省实验动物研究中心提供，生产许可证号:SCXK(鄂)2015-0018，经检疫后进入湖北中医药大学SPF级动物实验室饲养，室温20～24℃，湿度40%～60%，自由饮水摄食，自然昼夜节律光照。实验过程中对动物的处置符合2006年科技部发布的《关于善待实验动物的指导性意见》 主要仪器与试剂 mm×15 mm华佗牌毫针(苏州医疗用品厂有限公司)，HALH202H型电针治疗仪(北京华运安特科技有限责任公司)，快速血糖仪(美国强生)，精密电子秤(上海志荣电子科技公司)，全自动生化分析仪(美国Rayto)，离心机(上海安亭科学仪器厂TGL-16c)，电泳仪、电转仪(北京六一仪器厂)，酶标仪(北京德朗检视科技有限公司)，凝胶扫描成像系统(美国Alpha Innotech)，扫描仪(日本Canon)，超净工作台(苏州安泰空气技术有限公司)，荧光定量PCR仪(美国Life technologies) TAK-242(美国MCE)，TLR4抗体(美国Affbiotech)，NF-κB p65抗体、β-actin抗体(美国Abcam)，p-IκBα抗体(美国CST)，SureBeadsTM Starter Kit Protein A(美国Bio-Rad)，LightShift? Chemiluminescent凝胶迁移实验试剂盒(美国Thermo Scientific)，SDS凝胶制备试剂盒(武汉阿斯本生物技术有限公司)，Trizol(美国InvitrogenTM)，HRP标记的二抗(美国KPL)，SYbr?Premix Ex TaqTM(日本TaKaRa)，柯达医用X线胶片(日本Kodak)，核蛋白和胞质蛋白提取试剂盒(江苏凯基生物技术股份有限公司) 造模方法及分组 50只大鼠适应性饲养1周后，随机抽取8只为正常组，给予普通饲料(70%碳水化合物、20%蛋白质、10%脂肪)。其余42只大鼠给予高