儿童炎症性肠病免疫机制中NLRP1NLRP3炎性体信号通路的作用研究.docVIP

儿童炎症性肠病免疫机制中NLRP1NLRP3炎性体信号通路的作用研究 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：儿童炎症性肠病免疫机制中NLRP1NLRP3炎性体信号通路的作用研究 1 1、资料与方法 2 2、结果 4 3、讨论 5 文2：关注炎症性肠病研究的前沿信息 8 1发病机制研究的前沿信息 8 2诊断研究的前沿信息 9 3 治疗 研究的前沿信息 10 参考文摘引言： 11 原创性声明（模板） 13 文章致谢（模板） 14 正文 儿童炎症性肠病免疫机制中NLRP1NLRP3炎性体信号通路的作用研究 文1：儿童炎症性肠病免疫机制中NLRP1NLRP3炎性体信号通路的作用研究 炎症性肠病是一种慢性特发性肠病，主要包括克罗恩病、溃疡性结肠炎。数据统计显示，UC或CD发病率可达（344～758）/10万，尤其是伴有基础性自身免疫性疾病及免疫系统尚未发育完全的儿童人群发病风险更高[1，2]。同时，多项研究表明，IBD发病机制与机体免疫内环境改变直接相关[3，4]。故参与IBD免疫机制调节的信号通路已成为研究热点。有文献报道称，核苷酸结合寡聚化结构域样受体-1、核苷酸结合寡聚化结构域样受体-3可作为炎性体参与IBD发生、进展及免疫机制调节过程，从而影响肠道内环境和炎症的严重程度[5]。而Caspase-1、IL-1β是NLRP3、NLRP1炎性体信号通路的下游因子。为此，本研究推测NLRP3、NLRP1炎性体及其信号通路下游因子Caspase-1、IL-1β可能在儿童IBD免疫机制中发挥重要作用，但既往鲜有报道分析其在儿童IBD中的表达与免疫调节作用。故本研究选取126例IBD患儿进行分组研究，旨在为临床诊治提供参考依据。现报告如下。 1、资料与方法 临床资料 选取我院2018年1月至2019年3月间IBD患儿126例作为研究组，其中男70例，女56例，年龄3～12岁，平均年龄±岁。根据疾病类型分为CD亚组（n=32）与UC亚组（n=94）。纳入标准：（1）经结肠内镜检查、实验室检查，并结合临床症状、体征确诊为儿童IBD;(2）符合《炎症性肠病诊断与治疗的共识意见（2012年·广州）》中相关诊断标准[6];(3）临床资料完整，患儿监护人均知情本研究，自愿签订知情同意书。排除标准：（1）存在消化道肿瘤者；（2）伴有严重感染性疾病者；（3）合并严重营养不良者；（4）伴有内分泌疾病、代谢性疾病者；（5）存在恶性结、直肠疾病者；（6）合并心、肝、肾等重要脏器功能障碍者；（7）临床资料缺失者；（8）伴有消化道大出血者。 另选取同期因结肠息肉/先天性巨结肠行结肠切除手术的患儿120例作为对照组，其中男66例，女54例，年龄4～13岁，平均年龄±岁；85例为小结肠息肉，35例为先天性巨结肠。纳入标准：（1）患儿均具备手术指征；（2）临床资料完整者，且患儿监护人均知情本研究，自愿签订知情同意书。排除标准：（1）存在结肠感染者；（2）临床资料缺失者。 两组患儿年龄（t=，P=）、性别（χ2=，P=）差异无统计学意义。本研究经我院伦理委员会审批通过（ 实时逆转录-聚合酶链反应检测各mRNA 研究组在结肠内镜检查时采集患儿发病部位肠黏膜4g，对照组采集手术切除结肠组织断端正常肠黏膜4g。样本中加入组织裂解液，采用北京离心机厂的LDZ5-2型离心机进行离心处理，10000min、15min，于1mLTRIzol试剂裂解的样品中加入氯仿，剧烈摇晃，持续30s，室温下放置3min，于4℃条件下进行离心处理，12000min、15min，提取RNA。加入等体积异丙醇，于-20℃条件下放置30min，弃上清液，加入1mL75%乙醇，振荡，加入DEPC水（20μL），室温下放置5min，待完全溶解后，加入5μL逆转录酶，室温下放置20min，置入37℃水浴锅内，孵育30min。于其底物中加入上下游引物（表1），进行实时逆转录-聚合酶链反应（rRT-PCR），实施琼脂糖凝胶电泳、上样，进行凝胶成像，采用凝胶图像分析软件定量，得出PCR产物的光密度值，以目的基因的光密度值表示其mRNA相对表达水平。 表1各基因引物序列 血清IgM、IgG检测 采集清晨空腹静脉血3mL，离心处理，离心速度为2500min，持续15min，取上清液，保存于-20℃条件下待检。采用透射比浊法检测血清IgM、IgG水平，试剂盒及全自动生化分析仪购自美国RD公司，所有操作步骤严格遵循试剂盒说明书。 观察指标 记录（1）研究组和对照组NLRP3mRNA、NLRP1mRNA、Caspase-1mRNA、IL-1βmRNA的水平；（2)CD、UC亚组不同病情程度NLRP3mRNA、NLRP1mR