浅谈响应面法应用于绿色木霉产胶霉菌素培养基的优化（农业综合资料）.docVIP

浅谈响应面法应用于绿色木霉产胶霉菌素培养基的优化（农业综合资料） 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：浅谈响应面法应用于绿色木霉产胶霉菌素培养基的优化 1 1、材料与方法 2 2、结果与分析 3 文2：谈富集光合细菌培养基的优化研究 5 1　材料和方法 6 2　结果与分析 7 3　讨论 9 参考文摘引言： 9 原创性声明（模板） 10 文章致谢（模板） 11 正文 浅谈响应面法应用于绿色木霉产胶霉菌素培养基的优化（农业综合资料） 文1：浅谈响应面法应用于绿色木霉产胶霉菌素培养基的优化 胶霉菌素(gliotoxin)是环缩二氨酸类物质it，WeindlingandEmeon首次将这种物质从Trichodermalignorum中分离岀来，后来weindling将这种物质定义为胶霉菌素曰；胶霉菌素(gliotoxin)具有广谱抑菌旳、抑病毒叭抗肿瘤冋、免疫调节活性佝和诱导细胞凋亡叩等作用，胶霉菌素已经被应用于抗肿瘤药物的研制，其作为防治土传病害的生物农药也正在被研究，有很好的应用前景。但其产率较低，生产成本高限制了大规模生产使用。因此，本实验室分离1株绿色木霉(7Hc/ode/Tnavire)高产胶霉菌素高产菌株，中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心的保藏号为在前期单因素试验和正交因素试验筛选培养基工作的基础上，利用响应面分析优化培养基，以提高胶霉菌素产量。 1、材料与方法 试验时间、地点试验 于2017年2月—2018年5月在黄河三角洲京博化工研究院有限公司进行。 试验材料 菌种所用的绿色木霉菌株由本实验室分离得到。 培养基及培养条件 (1)种子培养基。加入20g/L葡萄糖的200g/L土豆汁，pH值自然，500mL摇瓶装液量100mL，28°C，170min培养48h。 (2)基础发酵培养基。葡萄糖20g/L、酵母粉10g/L、豆粕10g/L，磷酸二氢钾/L、硫酸锌/L、硫酸亚铁/L、，500mL摇瓶装液量100mL，接种量5%(v/v)，28°C，170min培养48h。 胶霉菌素效价的测定 高效液相进行胶霉菌素效价检测，摇瓶发酵完成的发酵液100mL，加入50mL分析纯乙酸乙酯，170min摇床震荡2h，离心后吸取上清液5mL，吹干后加入5mL分析纯甲醇溶解，用外标法绘制胶霉菌素标准曲线，根据峰面积计算发酵液胶霉菌素效价。 发酵培养基的优化 MinRunResIV试验设计的MinRunResIV试验设计：通过改变各试验因子较少水平，筛选对试验结果具有显著影响的试验因子。本试验利用该设计分别添加基础发酵培养基各成分的2个水平：葡萄糖(A)、酵母粉(B)、豆粕(C)、磷酸二氢钾(D)、硫酸锌(E)、硫酸亚铁(F)，考察基础发酵培养基各成分对胶霉菌素效价影响的显著性，试验设计见表1。 最陡爬坡试验根据MinRunResIV试验设计确定对胶霉菌素效价影响的显著性因子，以拟合的多元回归方程确定显著影响因素的爬坡方向和步长，以确定其取值中心。 响应面分析根据最陡爬坡试验确定显著影响因子的取值中心，釆用中心组合设计(CentralCompositeDesign，CCD)，每个因素取5个水平：中心点、士1、土2。 模型验证根据响应面分析预测的模型最大值进行验证。 统计分析 采用进行数据处理与分析。 2、结果与分析 显著影响因子的确定 MinRunResIV设计及响应值见表1，方差分析结果见表2，得到的回归方程(1) R=589+++)-(1) 模型相关系数疋=，所选模型显著。表2中为显著影响因子，可看出葡萄糖、豆粕、磷酸二氢钾、硫酸锌为显著影响因子，且葡萄糖、豆粕表现为正效应，磷酸二氢钾、硫酸锌为负效应，以此确定显著影响因子的爬坡方向。 中心组合设计中心点的确定 选取葡萄糖、豆粕、磷酸二氢钾和硫酸锌4个影响显著的因子，进行最陡爬坡试验，显著因素的变化方向、步长和响应值见表3。由表3可知，第3组试验葡萄糖26g/L、豆粕16g/L、磷酸二氢钾/L胶霉菌素效价最高。因此，以第3组的水平作为中心组合设计试验显著影响因子取值的中心。表3最陡爬坡试验设计及响应值。 中心组合设计及响应面分析 根据最陡爬坡试验确定显著影响因子的取值中心，运用软件中的CentralCompositeDesign中4因素5水平的试验设计，中心组合试验设计及响应值见表4，回归分析结果见表5，经拟合得到二次回归数学模型(2) 2=+++/4C++E++(^-^-^2(2) 模型相关系数疋=，说明模型拟合较好。葡萄糖、豆粕、磷酸二氢钾和硫酸锌4个显著影响因子对胶霉菌素效价的影响，见图1。运用软件对回归方程进行优化的结果为：葡萄糖/L、豆粕/L、磷酸二氢钾/L，预测胶霉