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2022/5/23 * 细胞融合举例2——薄荷的电诱导融合 亲本:E33、E47两个薄荷亲本原生质体（5-9×105）,0.7M山梨醇。 仪器:Eppendorf电转仪、融合杯（-250微升,-50微升）观察:DAPI染色:4,6-联脒-2-苯基吲哚是一种常用的荧光染料,与DNA的双链紧密结合。结合后产生的荧光基团的吸收峰是358 而散射峰是461nm,正好UV（紫外光）的激发波长正好是356nm。染色标记细胞核的位置。 参数: 电压:1.5-3V,超过2V破裂,选1.5V。 脉冲电压:0-300V。 脉冲时间:30-60S,每次增加10S,40S最佳。 2022/5/23 * 2022/5/23 * 六 融合细胞筛选 因融合的随机性而成为细胞融合的关键而必需的技术。 1筛选的原因与必要性 细胞融合是一个随机的物理过程,经融合后细胞将以多种形式出现,需要通过培养和筛选,除去不需要的细胞,分离出需要的杂种细胞,从而解决融合细胞的选择问题。 2022/5/23 * 问题:A与B融合过程中,你能预见有哪些 形式的细胞吗? A-B,A-A,B-B, A-A-A,B-B-B,A-A-B,B-B-A等多聚体。 未融合的A,B。 2022/5/23 * 2杂种细胞筛选方法 （1）细胞形态大小差异 （2）选择性培养基筛选法:利用原生质体对培养基成分要求与反应的差异选择杂种细胞的方法。 例如:利用抗性标记、酶缺陷型、激素需求差异等。亲本原生质体生长要求外源激素,而有的杂种细胞由于双亲互补作用会产生内激素,从而使杂种细胞能在无激素的培养基上生长。 （3）再生后杂种与亲本形态、性质差异 2022/5/23 * 细胞融合例子3:利用抗性标记进行 2022/5/23 * 2022/5/23 * 2022/5/23 * 第二部分体细胞杂交及其在育种中的应用 一 体细胞杂交育种的意义 1利于克服有性不亲和性,实现远源遗传重组。 2问题:与基因工程改造相比有什么优点? 植物的抗逆性多为多基因控制,因此易于实现多基因控制性状。 2022/5/23 * 3利于实现细胞质遗传形状的重组。 细胞质遗传:由胞质遗传物质引起的遗传现象（又称非染色体遗传）。 2022/5/23 * 二 技术路线 关键技术: 细胞融合 组织培养 2022/5/23 * 三 植物新品种培育举例 例子 :属间体细胞杂交 2022/5/23 * 油菜属于十字花科芸薹属紫罗兰属于十字花科紫罗兰属 2022/5/23 * 2022/5/23 * 2022/5/23 * 2022/5/23 * 结果与讨论 2022/5/23 * 2022/5/23 * KM8P主要用于原生质体培养,其特点是有机成分较复杂,它包括了所有的单糖和维生素,呼吸代谢中的主要有机酸。 2022/5/23 * 不亲和性 不亲和性:在有性生殖过程中,由于生物个体的细胞或组织水平上的不协调而使受精或接合不能正常进行,或是受精后不能产生后代的现象。例如:生殖细胞不能融合,或受精卵不能发育,或子代无繁殖能力等。不亲和性是稳定物种的重要机理之。 种间不亲和性:异种、异属生物个体之间的生殖不亲和现象常由染色体组的不同所造成 种内不亲和性:种内个体间的不亲和现象往往是受不亲和基因所制约。 2022/5/23 * 杂交 杂交:通过不同的基因型的个体之间的交配而取得某些双亲基因重新组合的个体。 杂交优势:两个遗传基础不同的植物或动物进行杂交,其杂交后代所表现出的各种性状均优于杂交双亲,比如抗逆性强、早熟高产、品质优良等 一般情况下,种间、种内杂交通过生殖细胞相互融合而达到。 由体细胞相互融合达到这一结果的过程称为体细胞杂交。 2022/5/23 * 远源杂交 远缘杂交:不同种属之间,或是地理上远缘的种内亚种之间个体的交配称为远缘杂交。 由于种属间存在着隔离机制,致使远缘杂交常表现不亲和或获得的远缘杂种表现不育。 体细胞杂交是解决远源杂交不亲和性的有力手段之一,更好地利用自然界基因资源,培育新物种。 2022/5/23 * 部分野生品种的块茎、果实虽不能食用,但它们的植株具有较强的抗病虫害、抗盐碱性和耐寒能力。因此,用野生马铃薯和番茄分别与马铃薯、番茄作物杂交,培育出了生存能力较强的杂交系植物。 杂交玉米等杂交植物比它们的亲本更为健壮,产量更高。 《自然》（Nature）2008年11月23日:中美科学家发现杂交植物比其亲本生长更好的一个原因:负责光合作用和淀粉代谢的基因在白天要更为活跃。 杂交拟南芥（中间）比其亲本（左和右）要大 2022/5/23 * 问题:有没有可能培育出地下结土豆,地上结番茄的超级植物? 1978年德国科学家梅歇尔斯将番茄与马铃薯进行体细胞杂交育成薯番茄“泡马豆”（p