药物研究的生物化学基础.pptxVIP

药物研究的生物化学基础;生物药物分离的主要原理:;2、 依照生物大分子的特性 ①依照分子形状和分子大小不同: 差速离心、超离心、膜分离透析、超滤、凝胶过滤 ②依照分子电离性质(带电性)不同: 离子交换法、电泳法、等电聚焦法 ③依照分子极性大小与溶解度不同: 溶液提取法、逆流分配法、分配层析法、盐析法 ④依照配基特异性不同 亲和层析法;二、生物合成技术 生物合成是利用生物细胞的代谢反应(更多的是利用微生物转化反应)来合成化学方法难于合成的药物或药物中间体。;微生物转化反应: 是利用微生物的代谢作用来进行某些化学反应,确切地说就是利用微生物代谢过程中某种酶对底物进行催化反应,以生成所需要的活性物质。; 半合成药物是指一个药物其部分结构由天然资源得到,然后用化学合成法制得最终产品或应用微生物转化将化学合成的中间产物,通过某些生物合成步骤来解决药物合成中难于进行的化学反应,从而获得最终有效化合物。;三、生物技术; 基因工程 细胞工程 酶工程 发酵工程;重组DNA技术(基因工程)基本原理:;(一)目的基因的获取;(二)基因载体的选用;载体的选择标准;质粒 (plasmid);(三)限制性核酸内切酶;;(四)重组体的构建 即外源基因与载体的连接;;2、 平端连接 适用于:限制性内切酶切割产生的平端 粘端补齐或切平形成的平端;;3、 同聚物加尾连接 在末端转移酶(terminal transferase)的作用下,在DNA片段末端加上同聚物序列、制造出粘性末端,再进行粘端连接。;;受体菌条件 安全宿主菌 限制酶和重组酶缺陷 处于感受态(petent) ;(六)重组体的筛选 1、 重组体的表型进行筛选 抗药性标记筛选、营养素的依赖筛选 2、 限制酶切图谱分析鉴定 3、利用核酸杂交技术进行鉴定;(插入失活法) 抗药性标记选择;组氨酸缺陷 型大肠杆菌;重组DNA技术操作过程可形象归纳为 ;DNA重组技术的主要应用:;第二节药物质量控制的生物化学基础;一、药物质量控制的常用生化分析法;(二) 电泳分析法;(三) 酶法分析;1、终止反应法 2、连续测定法 3、循环放大分析法;二、生物药物质量???制的生化分析方法;2、 多肽与蛋白质分子量的测定 使用较多的是超速离心法,凝胶层析法和SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法等。;SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法;3、 蛋白质的定量测定 (1) 物理性质:紫外分光光度法,折射率法, 比浊法。 (2) 化学性质:凯氏定氮法,双缩脲比色法, Folin-酚法,BCA法。 (3) 染色性质:考马斯亮兰G-250结合法、银染、 金染。 (4) 其他:荧光激发。;4、胶体金比色法 胶体金是一种带负电荷的疏水性胶体,加入蛋白质后,红色转变为蓝色,595nm处测定样品的吸收值,计算含量。; 5、 生物质谱法: 多肽和蛋白质的分子量可用MALDI/MS(基质辅助激光解吸离子化质谱法)或ESI/MS(电喷雾离子化质谱法)直截了当测定,用质谱法测定蛋白质的分子量简便,快速、灵敏、准确。;(二) 核酸类药物的主要分析方法;(三) 酶类药物的分析 酶类药物的主要质量指标是它的催化活力。;第三节药理学研究的生物化学基础;神经递质;乙酰胆碱受体功能模式图;※ G蛋白(guanylate binding protein);;与配体结合后具有酪氨酸蛋白激酶活性,如胰岛素受体?insulin growth factor receptor, IGF-R?? 表皮生长因子受体(epidermal growth factor receptor, EGF-R)。;4、受体-转录因子型;(三)跨膜信号转导与细胞内信号转导 (1)不同种类的受体使用由共同组分构成的转导信号 (2)在信号转导通路中不同类型的磷酸化同时起作用 ;(四)细胞信号转导与药物研究;信号转导干扰药物的药效和副作用取决于:;(五)药物作用的靶酶 药物对靶酶的作用: 调节酶量 调节酶活力;酶抑制剂应用临床的条件:;(六)细胞生长调节因子 1、细胞生长刺激因子类 2、细胞生长抑制因子类 ;(七)细胞凋亡的生物化学;