聚合酶链反应(PCR)及其应用.pptVIP

* * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * * 影响PCR扩增效率的因素: PCR定量的困难? 引物/靶的杂交 反应试剂的相对量 样本在扩增仪中的位置的不同 临床样本中DNA聚合酶抑制物的存在 PCR扩增模板的量 靶核酸链的再退火及酶过量可致E降低 PCR 和定量问题 高浓度/高效率 高浓度/低效率 低浓度/高效率 N : 扩增分子的数目 n : 扩增循环的次数 log-phase analysis N n end-point analysis 定量PCR与定性PCR测定的最根本的区别 定量PCR测定的测定点为PCR扩增的指数扩增期;而定性PCR测定的测定点则多为PCR扩增的平台期。 定性PCR测定方法 荧光PCR（ Taq Man和分子信标等） PCR-膜上杂交 PCR-ELISA PCR-RFLP或测序等 定量PCR的方法 定量PCR方法可归为三大类，即外标方法、动力学方法和内标共扩增方法 定量还可分为绝对定量（即测定X的分子数量）和相对定量（即测定不同样本中X的比率） 用外标准的定量PCR方法 使用外标的定量PCR方法