病毒形态学诊断.docVIP

实验十病毒的形态学诊断、培育方法和血清学试验 目的 （一）察看病毒包涵体，并掌握其诊断意义。 （二）掌握病毒的形态并认识病毒包膜的获取。 （三）认识病毒培育的三种方法。 （四）掌握病毒学中主要血清学反应的原理 （五）熟习病毒血凝控制试验的测定过程 内容 （一）病毒的形态学诊断 病毒的电镜照片（示教） 狂犬病毒包涵体（示教） 麻疹病毒包涵体（示教）（二）病毒的培育法（录像） 病毒的动物接种法 病毒鸡胚培育法 病毒的组织培育法 （三）血凝控制试验（操作） 一、病毒的形态学诊断 病毒形态学研究方法可分为两种：一种是应用电子显微镜技术，察看其大小，形态及摆列特点，以帮助诊断；另一种是应用光学显微镜经过涂片染色或切片染色，察看包涵体。病毒感染细胞所产生的包涵体，其特点基本是固定的，故对病毒性疾病的诊断拥有一定价值。 【方法】 （一）病毒的电镜照片（示教） 察看腺病毒、疱疹病毒的电镜照片，注意其形态构造、大小、摆列、及其包膜的形成。 （二）狂犬病病毒内基（Negri）包涵体（示教） 用高倍镜或油镜察看经HE（苏木紫-伊红染色）染色的死于狂犬病的犬脑组织切片，注意包涵体在细胞内的形态、地址及染色性。 （三）麻疹病毒包涵体（示教） 用高倍镜或油镜察看经麻疹病毒培育后，HE染色的人胚或羊膜细胞标本片，注意包涵体在细胞内的地址、形态、染色性以及细胞交融状况。 二、病毒动物接种法 实验动物在病毒学研究中有四方面用途：①分别判断病毒，如乙脑病毒；②连续传代经过，以减弱有毒株对人的致病力，如狂犬病病毒；③制备抗血清；④病毒致病机理的研究。 常用的实验动物有小白鼠、地鼠、豚鼠、家兔、绵羊、鸡、猴等。在病毒学研究中，动物接种时为防备动物自己可能带有病毒，多采纳实验室自己生殖的动物。第一依据研究目的选择动物种类，对病毒 致病体系的研究，则选择愈凑近人类的高等动物（比方灵长类）研究结果愈有价值；其次要注意动物的 年龄、性别和接种的路子等各种要素，一般年幼的动物比成年动物对病毒的敏感性高。至于接种的路子 应依据病毒的嗜性决定，比方脑炎病毒以脑内注射最敏感。 （一）小白鼠尾静脉接种（录像） 【资料】 动物：小白鼠 病毒悬液 碘酒、酒精、二甲苯、无菌0.25ml注射器、4号针头及小铝匣【方法】 将小白鼠固定在小铝匣内，露出尾部，用碘酒消毒尾部，尔后用酒精棉球连续擦尾部皮肤（必需时用二甲苯擦）使血管扩大。 尾背和左右双侧三根血管皆为静脉，可选一根扩大较好的静脉作接种用。左手拇指捏住尾部的 远端，向下弯45°，右手持注射器，于弯处进针静脉，推液0.1毫升。 注意：推注时遇阻力且皮下隆起发白时，表示针头不在血管内应拔出重新进针；如针头在血管内， 推注时不感阻力，且可看到血管中血液因为注入液体尔退后。 接种后每天察看动物发病状况。 （二）小白鼠鼻内接种（录像） 【资料】 小白鼠、流感病毒鼠肺适应株病毒悬液、无菌小试管、无菌毛细管、麻醉用乙醚、棉球及小玻瓶。 【方法】 第一将沾有乙醚的棉球放入一干净小玻瓶内。左手握小瓶，右手抓住小白鼠，将其头部塞入瓶口，进行浑身麻醉。注意麻醉深度，不宜太浅或太深，太深时易遭致麻醉死亡或非特异性吸入性肺炎，太浅则易在滴种时打喷嚏。 用无菌毛细吸管吸取病毒悬液少量，连同毛细吸管插在无菌试管中备用。 用左手将小白鼠握在手掌中，大拇指及食指抓住小白鼠耳部使其头部朝前并呈仰卧地址，另一手取早先吸有病毒悬液的吸管，慢慢滴出一点于滴管口而不使其自然掉落，呈悬滴状。将悬滴凑近动物 鼻尖，动物在呼吸时自然吸入，一般为0.03～0.05毫升，不宜过多。 小白鼠慢慢清醒，在饲养盒中每天开始发病，发病的症状常为毛耸、咳嗽、不食、甚至死亡。解剖尸体可察看到肺炎或血性病灶。 （三）小白鼠脑内接种（录像） 【资料】 脑炎病毒（小白鼠脑脊髓炎病毒）悬液。脑组织先用无菌生理盐水洗去血液，再加10％脱脂奶盐水 研磨成10－1悬液，尔后用 3000转/分别心积淀 30分钟，吸取上清液供接种用。 小白鼠：3 周龄，体重 6～8克。 无菌0.25 毫升注射器及针头（4号）、煮针锅、碘酊、棉签。 【方法】 1.以无菌 0.25毫升注射器抽取脑炎病毒悬液 0.1毫升，去除注射器内的气泡。 拿出小白鼠，左手将小白鼠固定，固准时用大拇指和食指捏住小白鼠的头部，左手手掌轻轻按住小白鼠的体部。 右手以棉签蘸以碘酒，消毒小白鼠颞部皮毛（不碰到眼）。 4. 右手拿注射器在小白鼠颞部（眼与耳根连线的中点略偏耳朵的方向）刺入，进入颅腔，进针 2～ 3毫米，不要插得太深，注射量为 0.02～0.03毫升。 5. 注射达成，将用过得注射器放入煮针锅内煮沸消毒。 动物一般在3～4天后开始发病，食欲减退， 活动愚痴，毛耸，震颤，慢慢发展为麻痹，瘫痪而死亡。 本法适用于一些脑炎病毒的分别培育。 三、病毒鸡胚培育