微生物实验手册.pdf

文档来源为:从网络收集整理.word版本可编辑.欢迎下载支持. 微生物实验室规则与安全 微生物学实验室规则 医学微生物学实验的对象大多为病原微生物，具有传染性，因此要求进入实验室 后必须严格遵守以下实验室规则： 1．进入实验室应穿白大衣，离室时脱下，反折放回原处，不必要的物品不得带 入实验室，必须带入的书籍和文具等应放在指定的非操作区，以免受到污染。无 菌操作时必须戴口罩，并不得开电风扇。 2．实验室内禁止饮食、抽烟，不得高声谈笑或随便走动。 3．各种实验物品应按指定地点存放，用过的器材必须放入消毒缸内，禁止随意 放于桌上及冲入水槽。 4．须送温箱培养的物品，应做好标记后送到指定地点。 5．实验过程中发生差错或意外事故时，禁止隐瞒或自作主张不按规定处理，应 立即报告老师进行正确的处理。如有传染性的材料污染桌面、地面等，应立即用 0.2%~0.5% “84”消毒液浸泡污染部位，作用5～10min后方可抹去。如手被活 菌污染也应使用上述消毒液浸泡5～10min后，再以自来水反复冲洗干净。 6．爱护室内仪器设备，严格按操作规则使用。节约使用实验材料，不慎损坏了 器材等，应主动报告老师进行处理。 7实验完毕，应物归原处并将桌面整理清洁，实验室打扫干净。最后以0.2%~0.5% “84”消毒液浸泡手5min，洗净后方可离开实验室。 实验一 器皿包扎及消毒与灭菌 一、实验目的 1、了解玻璃器皿的清洗、棉塞制作、移液管和培养皿的包扎方法。 2、了解干热灭菌、紫外线灭菌、微孔滤膜过滤除菌和高压蒸汽灭菌的原理和应 用范围。 3、掌握高压蒸汽灭菌的操作技术。 二、实验原理 （1）实验室中使用的玻璃器皿简介 微生物学实验所用的玻璃器皿，大多要进行消毒、灭菌和（将“和”改为 “才能”）用来培养微生物，因此对其质量、洗涤和包装方法均有一定的要求。 玻璃器皿的质量一般要求硬质玻璃，才能承受高温和短暂灼烧而不致破坏；玻 璃器皿的游离碱含量要少，否则会影响培养基的酸碱度；对玻璃器皿的形状和 包装方法的要求，以能防止污染杂菌为准；洗涤玻璃器皿的方法不当也会影响 实验的结果。目前微生物学实验室中，有些玻璃器皿（如培养皿、吸管等）已 被一次性塑料制品所代替，但玻璃器皿仍是重要的实验室用具。 （2）灭菌的常用方法和基本原理 实验室常用的灭菌方法有干热灭菌法、紫外线照射法、微孔滤膜过滤除菌法 和高压蒸汽灭菌法等。 A.干热灭菌是用电热干燥箱（图1）加热，利用高温使微生物细胞内的酶、蛋白 质凝固变性而达到灭菌的目的。 1文档收集于互联网，已整理，word版本可编辑. 文档来源为:从网络收集整理.word版本可编辑.欢迎下载支持. B.紫外线杀菌机制主要是因为它诱导了胸腺嘧啶二聚体的形成和DNA链的交联， 从而抑制了DNA 的复制。 C.微孔过滤除菌（图2、图3）是通过机械作用滤去液体或气体中细菌、真菌孢 子等的方法。 D.高压蒸汽灭菌也是使蛋白质变性而灭菌，高压蒸汽灭菌锅（图4、图5、图6） 灭菌时是将待灭菌的物品放在一个密闭的加压灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅隔 套间的水沸腾而产生蒸汽。待水蒸汽急剧地将锅内的冷空气从排气阀中驱尽，然 后关闭排气阀，继续加热，此时由于蒸汽不能溢出，而增加了灭菌器内的压力， 从而使沸点增高，得到高于100℃的温度。导致菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌 的目的。 图1 电热干燥箱的外观和结构 图2 2文档收集于互联网，已整理，word版本可编辑. 文档来源为:从网络收集整理.word版本可编辑.欢迎下载支持. 图3 图4 高压蒸汽灭菌锅 3文档收集于互联网，已整理，word版本可编辑. 文档来源为:从网络收集整理.word版本可编辑.欢迎下载支持. 图5 卧式灭菌锅 图6 手提式灭菌锅 1.安全