基因工程的酶学基础 .pptVIP

标记 已知序列的核酸片断 ② 探针的标记方式 标记 已知序列的核酸片断 带有放射性的已知序列的核酸片断 5’ 3’ 第六十二张，课件共一百二十二张，编辑于2022年5月 ③ DNA聚合酶I 对探针序列的标记 切口转移法(nick translation )： 放射性同位素标记： DNA聚合酶I 同时具备5’?3’外切酶活性和5’?3’的聚合酶活性（以及3’?5’外切酶活性）。 第六十三张，课件共一百二十二张，编辑于2022年5月 5’?3’外切酶活性从DNA切口的下一段DNA5’端除去一个核苷酸后，聚合酶活性就会在切口的上一段DNA的3’一侧补上一个新的核苷酸。 切口 切口 5’ 5’ 3’ 3’ 5’ 3’ 5’ 3’ 第六十四张，课件共一百二十二张，编辑于2022年5月 纯化的DNA片断 DNase I 制造单链切口 DNA Pol I 进行切口转移 一种?-32P-dNTP和dNTPs 5’ 5’ 5’ 5’ 5’ 5’ 5’ 5’ 3’ 3’ 3’ 3’ 3’ 3’ 3’ 3’ 32P-dNTP 32P-dNTP 从头至尾都被标记 8 第六十五张，课件共一百二十二张，编辑于2022年5月 2. Klenow fragment 具有5’?3’聚合酶活性和3’?5’外切酶活性。（失去了5’?3’外切酶活性）。 （1）Klen