红色诺卡氏菌细胞壁骨架多糖成分的分离纯化（高等教育学资料）.docVIP

红色诺卡氏菌细胞壁骨架多糖成分的分离纯化（高等教育学资料） 文档信息 ： 文档作为关于“医学心理学”中“兽医”的参考范文，为解决如何写好实用应用文、正确编写文案格式、内容素材摘取等相关工作提供支持。正文5897字，doc格式，可编辑。质优实惠，欢迎下载！ 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：红色诺卡氏菌细胞壁骨架多糖成分的分离纯化 1 1 材料与方法 2 2 结果与分析 5 3 讨论 6 文2：高丽参多糖GPⅡ分离纯化组成和抗氧化活性研究 7 1 实验材料 7 2 实验方法 8 3 结果与分析 9 4 结论 11 参考文摘引言： 11 原创性声明（模板） 12 文章致谢（模板） 12 正文 红色诺卡氏菌细胞壁骨架多糖成分的分离纯化（高等教育学资料） 文1：红色诺卡氏菌细胞壁骨架多糖成分的分离纯化 基金项目：福建省教育厅项目(JB12029) 红色诺卡氏菌(Nocardia rubra)是一种放线菌，是目前所发现具有最强细胞毒活性和免疫促进作用的一种微生物.因为一方面红色诺卡氏菌具有最强细胞毒活性，说明这种微生物对肿瘤细胞有最强的毒性，可以直接杀灭肿瘤细胞；另一方面具有免疫促进作用，说明这种微生物可以调节并增强机体的免疫力.研究表明[1]:红色诺卡氏菌细胞壁骨架（以下简称N—CWS），在增强体内巨噬细胞、T细胞和自然杀伤细胞的活性的同时，还能诱导机体产生LAK细胞等，产生抗癌作用，有效地抑制肿瘤生长.所以N-CWS已经成为治疗肿瘤的有效制剂.它具有提高机体内T辅助性细胞和杀伤细胞的功能，增强巨噬细胞和自然杀伤细胞的免疫活性，抑制肿瘤和增强免疫能力的功效.其主要有效成分为[2]霉菌酸，阿拉伯半乳糖，粘肽.由于N-CWS的组成复杂，使用过程仍然存在一定的副作用，其起主要作用的物质不明确，影响了后续对其作用机制和药用开发.而有关N-CWS的多糖成分分离纯化的报道较少，本文研究了N-CWS的多糖成分的提取及分离纯化，为进一步分析该产品中多糖的成分和结构提供参考，为新药的开发与制备提供基础数据。 1 材料与方法 实验材料及仪器 主要材料和试剂: 红色诺卡氏菌(由本实验自行培养传代提供)；Sephadex G-100（为Pharmacia公司产品）；葡萄糖(广东汕头西陇化工厂产品，AR);苯酚(广东汕头西陇化工厂产品，AR);硫酸(广东汕头西陇化工厂产品，AR);阿拉伯糖(广东汕头西陇化工厂产品，AR);其他生化试剂均为分析纯。 主要仪器 可见分光光度计（V-1100型，上海美谱达仪器有限公司）；电子天平（AL104，梅特勒-托利多仪器有限公司）；电热恒温振荡水槽；微量离心机（TG16-W型）；电热鼓风干燥箱（101-2型，上海阳光实验仪器有限公司）；BT1-100恒流泵（上海琪特分析器有限公司）；BSZ-100A自动部分收集器（上海琪特分析器有限公司）；凝胶层析柱（㎝×㎝为Pharmacia公司产品）；TGL-16M高速台式冷冻离心机。 实验方法 红色诺卡氏菌细胞壁骨架的制备 红色诺卡氏菌经菌体培养，菌体破碎，蛋白酶处理，脱色及有机溶媒处理后即可获得白色的红色诺卡氏菌细胞壁骨架制剂[3] 多糖PS的提取 800ugN-CWS样品加入/L HCl溶液酸解[4]，放于60℃的电热箱内孵育离心15min 后收集上清液并浓缩，加3倍体积的无水乙醇，混匀后静置过夜使多糖充分沉淀，离心收集PS沉淀。 标准曲线的制备[5] 准确称取标准阿拉伯糖50mg于500mL容量瓶中，加蒸馏水至刻度.分别吸取0、、、、、、、、、阿拉伯糖溶液，各以水补至，然后加入6%的苯酚溶液，再加入浓硫酸，迅速震荡摇匀，置于25℃水浴30min，取出于490nm测光密度值，以蒸馏水为空白对照，以阿拉伯糖微克数为横座标，光密度值为纵坐标，绘制标准曲线。 样品溶液的制备和含糖量的测定 将样品加水至，用移液器吸取样品液100μL并补水至，然后加入6%的苯酚溶液，再加入浓硫酸，迅速震荡摇匀，置于25℃水浴30min，取出用V-1100型分光光度计于490nm测光密度值，以标准曲线计算其多糖含量.多糖得率计算：多糖得率=(多糖质量／样品质量)X100％ Sephadex G-100凝胶柱层析 装柱:称取5克Sephadex G-100，加入50ml去离子水，浸泡溶胀过夜.[6]将悬浮细颗粒，随上层液体倾去之后，加入等体积的/LNaOH浸泡并间歇搅拌2h倾去，用蒸馏水洗涤至中性，用／L HCl溶液浸泡1h，用蒸馏水洗至中性，再用／L NaOH溶液浸泡2h.最后用蒸馏水洗至pH中性，备用.采用上述处理过的Sephadex G-100凝胶装柱.装柱过程需将凝胶缓慢加入，不