表面擦拭微生物限度检查法回收率实验方案.docVIP

湖北天圣康迪制药有限公司 GMP文件 文件编码： 共4 文件名称 表面擦拭微生物限度检查法回收率实验方案 页 拟订人 审核人 批准人 拟订日 审核日 年月 日 年月 日 批准日期 年 月 日 期 期 颁发部 质管部 颁发数 2份 生效日期 年 月 日 门 量 散发部 门 质管部、QC各1份 及数量 表面擦拭微生物限度检查法 回收率实验方案 目的 对表面擦拭微生物限度检查法回收率进行考据，确认所采用的方法适合 于供试品的微生物限度检查。 2．范围 本方案适用于表面擦拭微生物限度检查法回收率的考据。 3．职责 质管部负责考据方案起草、组织实施、起草考据报告及送审 考据过程考据用菌种： 所用菌种表1 菌种名称编号本源 大肠埃希菌【CMCC（B）44103】 金黄色葡萄球菌【CMCC（B）26003】 白色念珠菌【CMCC（F）98001】 枯草芽孢杆菌【CMCC（B）63501】 菌株选择的原则：代表性，普遍性，低或非致病性，标准菌株。 菌种的要求：不得超过5代。采用适宜的方法保存。 加菌量：50～100cfu。 菌液的制备 取经37℃培养18-24小时，大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢 杆菌肉汤培养物1ml加9ml生理盐水10倍稀释至10-5～10-7，为50～100个/ml， 做活菌计数备用。 取经25℃培养18-24小时的白色念珠菌霉菌液体培养物1ml加9ml生理盐水10倍稀释至10-5～10-6，为50～100个/ml，做活菌计数备用。 回收率的测定： 2 将经灭菌的开孔面积为20cm的金属模板放在试验物体表面，分别向无 菌物体表 面接种1ml金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、白色念珠菌和枯草芽孢杆菌的菌 2 悬液，接种面积为20cm，并在层流下进行干燥。考据结束后用75%的酒精擦 洗染菌表面。 取无菌棉签用%无菌氯化钠溶液稍沾湿,在板孔范围内擦抹5次，换1无菌棉签同法再擦抹5次，2支棉签共擦抹10次，然后剪去手接触部分棉棒，将棉签放入含10mL灭菌生理盐水的采样管内。摇匀取1mL倒平板，每次倒三 个平板。 分别培养计数。用同样的方法重复操作三次。 试验要进行三次独立操作，每次试验的回收率要≥70%方可认为该方法 合适。 回收率计算 试验结果下表，棉签擦拭法的结果是每次试验三个平板的平均菌落数再 乘以稀释倍数（10）。 金黄色葡萄球菌试验结果 金黄色葡萄球菌试验结果表2 实验次数  1号平皿  2号平皿  3号平皿  平均菌落检测结果数 1 2 3 根据表中的数据，回收率计算如下表3： 实验次数  菌液组菌落数  实验组菌落数  回收率（  平均回收 %） （%）  范围 1 2 3 吻合要求  □  不吻合要求□ 检查人  日期 复核人日期 大肠埃希菌试验结果 大肠埃希菌试验结果表4 实验次数 1号平皿 2号平皿 3号平皿 平均菌落检测结果 数 1 2 3 根据表中的数据，回收率计算如下表5： 实验次数理论菌总检测结果回收率（%）平均回范围 数收（%） 1 2 3 吻合要求□不吻合要求□ 检查人日期 复核人日期 白色念珠菌试验结果 白色念珠菌试验结果表6 实验次数1号平皿2号平皿3号平皿平均菌落检测结果 数 1 2 3 根据表中的数据，回收率计算如下表7： 实验次数 理论菌总检测结果 回收率（%）平均回 范围 数 收（%） 1 2 3 吻合要求□不吻合要求□ 检查人日期 复核人日期 枯草芽孢杆菌试验结果 枯草芽孢杆菌试验结果表8 实验次数1号平皿2号平皿3号平皿平均菌落检测结果 数 1 2 3 根据表中的数据，回收率计算如下表9： 实验次数理论菌总检测结果回收率（%）平均回范围 数收（%） 1 2 3 吻合要求  □  不吻合要求  □ 检查人 复核人  日期 日期 方法确认结论 吻合要求  □  不吻合要求  □ 检查人 复核人  日期 日期 5.偏差及办理 操作人：  复核人：  日期：  年月日 考据报告 考据小组负责人根据测试数据，进行统计解析，起草考据报告。并根据考据结果拟定再考据周期。