小鼠肠干细胞群对外源性草酸耐受性的研究（医疗卫生论文资料）.docVIP

小鼠肠干细胞群对外源性草酸耐受性的研究（医疗卫生论文资料） 文档信息 ： 文档作为关于“医学心理学”中“药学”的参考范文，为解决如何写好实用应用文、正确编写文案格式、内容素材摘取等相关工作提供支持。正文5718字，doc格式，可编辑。质优实惠，欢迎下载！ 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：小鼠肠干细胞群对外源性草酸耐受性的研究 2 1 材料与方法 2 2 结 果 3 3 讨 论 4 文2：乌头碱和甘草酸作用的研究 6 1 仪器与试药 7 2 实验方法 7 3 结果 8 4 讨论 8 参考文摘引言： 9 原创性声明（模板） 10 文章致谢（模板） 10 正文 小鼠肠干细胞群对外源性草酸耐受性的研究（医疗卫生论文资料） 文1：小鼠肠干细胞群对外源性草酸耐受性的研究 泌尿系结石是一个全球性的疾病，人群患病率约1%-5%。草酸钙结石的发病率约占泌尿系结石总发病率的60%-80%，而特发性草酸钙结石患者可占草酸钙结石症全部病例数的80%以上。草酸钙肾结石的成石因素包括高草酸尿、高钙尿、低尿量、低枸橼酸尿、高尿酸尿及成石抑制物缺乏等，其中最重要的成石原因为高草酸尿。而草酸在消化道吸收异常增多是特发性高草酸尿形成的重要因素[12]。肠干细胞是一种位于肠隐窝底部的成体干细胞，它在理论上具有无尽的增殖和分化功能[34]。研究体外水平肠干细胞群对外源性草酸的耐受能力，对进一步研究肠损伤以及一些代谢性疾病(如特发性草酸钙结石)有着重要的意义。 1 材料与方法 小鼠肠干细胞群的分离培养 主要试剂的配制方法 细胞培养液的配制方法：DMEM培养基中加入10%的新生牛血清(购自GIBYCO公司)。除此以外，培养液中还含有以下成分：表皮生长因子(epidermal growth factor， EGF)20ng/mL，胰岛素2μg/mL，谷氨酰胺2mmol/mL，青霉素及链霉素各100u/mL。 本次实验中，肠干细胞群的分离采用酶消化法。所用的酶消化液含有两种成分：透明质酸酶(购自Sigma公司，应用液浓度为100u/mL)，Ⅺ型胶原酶(购自Sigma公司，应用液浓度为300u/mL) 细胞清洗液采用含有50mL/L新生牛血清的DMEM培养液，加入青霉素及链霉素，使其浓度均达到200u/mL。 草酸钠储备液配制方法：取草酸钠溶于100mL磷酸盐缓冲液(phosphate buffer solution， PBS)中，过滤除菌后分装备用。 肠干细胞群的分离和培养 取孕17d昆明系小白鼠，断颈法处死后打开胎盘取出胚胎鼠肠组织，采用酶消化法分离细胞(37℃，20min)，种植于24孔细胞培养板中(购自Corning公司)，放置在5%二氧化碳培养箱内培养。48h后进行第一次换液，以后每72h换液1次。连续观察、记录细胞生长情况。 肠干细胞群的鉴定 获得的原代细胞传5代后(约25d)，将细胞转至事先装有盖玻片的24孔板中，行细胞爬片，每72h换液一次。7d后，固定细胞(固定液由丙酮和无水乙醇按1∶1配制)。将细胞爬片利用角蛋白18亚型抗体(购自Sigma公司)行免疫组织化学染色，以鉴定细胞的组织来源。 细胞培养液草酸浓度的测定 采用离子色谱法反复测量细胞培养液中草酸浓度。 筛选肠干细胞群所能耐受的外源性草酸浓度 选取8孔生长状态较好的细胞，分别加入经过滤除菌后的草酸钠储备液(27g/L)200、175、150、125、100、75、50、25μL后，每孔用细胞培养液补齐至1mL，使每孔中草酸钠浓度分别为40、35、30、25、20、15、10、5mmol/L。置入CO2恒温培养箱内培养72h后观察细胞状态。 2 结 果 肠干细胞群的分离和培养结果 细胞种植3h后，显微镜下就可见有细胞开始贴壁生长，48h后，细胞贴壁基本完成。显微镜下可见，上皮样细胞呈集落状生长，主要有三种克隆：典型上皮构成的克隆，约占30%;扁平上皮细胞构成的克隆，约占20%;两种细胞混合生长的克隆，约占50%。培养出的肠干细胞群在第3、4代达到生长分化的顶峰;而后干细胞培养48h的肠干细胞群镜下可见上皮样细胞呈集落状生长，其中，由典型上皮构成的克隆约占30%(A)，由扁平上皮细胞构成的克隆约占20%(B)，混合生长的克隆约占50%逐渐减少，成熟的肠上皮细胞逐渐增多。经1个多月的培养，传至第7-8代，肠干细胞群开始凋亡。上皮细胞在传代生长的过程中，细胞形态逐渐改变，有些细胞在形态上类似于成纤维细胞等间质细胞，但角蛋白18亚型抗体染色为阳性，确认其为肠干细胞群。 细胞培养液中草酸浓度 经反复测量，细胞培养液中草酸浓度为零。 肠干细胞群对外源性草酸的耐受状况 经多次重复实验可见，草酸