分枝杆菌分离培养和药敏试验.pptVIP

结果报告 2.观察时发现非结核分枝杆菌生长时，应报告污染。培养污染率应控制在2%~5%范围。污染率过高，提示培养基灭菌不佳，标本前处理、接种等环节有误，应当分析原因，采取相应措施。 第三十页，共八十一页。 结果报告 培养结果报告方式 (1)分枝杆菌培养阴性:斜面无菌落生长,以“培养阴性”报告,不可以“–”表示. (2)分枝杆菌培养阳性（１＋）：菌落生长占斜面面积的1/4． (3)分枝杆菌培养阳性（2＋）：菌落生长占斜面面积的1/2． (4)分枝杆菌培养阳性（3＋）：菌落生长占斜面面积的3/4． (5)分枝杆菌培养阳性（4＋）：菌落生长布满整个斜面 (6)报实际菌落数:菌落生长不足斜面面积1/4． 第三十一页，共八十一页。 分离培养的注意事项 选择痰标本中脓性、血样、干酪样的部分进行培养阳性率较高。 从加入前处理液到接种的时间不得多于20分钟. 涡旋振荡、离心、倾倒上清液、接种时容易产生气溶胶，应注意使用安全仪器，正确操作。 发现培养基上菌落生长需经抗酸染色确认后方可报告阳性。 第三十二页，共八十一页。 分离培养的优点 敏感性较直接涂片法高，理论上10~100条菌/毫升可检出阳性； 特异性较直接涂片法高，可以从菌落生长速度，色素产生初步判断非结核分枝杆菌； 分离出具有活力的纯培养物，为进一步试验提供基础。 第三十三页，共八十一页。 分离培养的缺点 需时长，根据接种量的大小，一般2~8周才能得到肉眼可见菌落。 结果受标本保存运送时间，培养基成分和质量，前处理方法等影响，操作较直接涂片法复杂，需经严格培训。 需培养基凝固灭菌器，离心机，涡旋振荡器，恒温培养箱等设备。 成本是直接涂片法的7~8倍。 第三十四页，共八十一页。 分枝杆菌快速培养检查 分枝杆菌快速培养检查是使用分枝杆菌快速培养分枝杆菌仪，通过测定细菌生长代谢而间接检测分枝杆菌生长情况的方法。由于应用营养丰富的液体培养基，并且检测仪能连续检测，故提高了从标本中分离分枝杆菌的敏感性进而缩短报告结果的时间。为保证检查方法的可靠性，目前快速培养检查系统除提供相应仪器，试剂以外，均根据不同系统制定了相应的临床标本前处理、接种、检测和报告结果的规程,故在进行相应的检查时，结果的可重复性和可比性均能得到认可。 第三十五页，共八十一页。 分枝杆菌快速培养检查 在进行分枝杆菌快速培养检查时，标本接种前的去污染处理，必须严格按照系统说明书中规定的方法进行。孵育检测过程中系统报告阳性时，相应标本的培养液必须首先进行抗酸染色镜检，发现抗酸杆菌后方可发出阳性报告。 第三十六页，共八十一页。 几种常见分枝杆菌快速培养仪 Bectec -TB640全自动分枝杆菌培养仪在营养丰富的培养液中加入放射性14C标记的棕闾酸作为底物，分枝杆菌生长过程中分解14C棕闾酸，产生CO2，仪器通过检测CO2含量换算成生长指数。培养时间通常需要4~25天。 优点：简便、快速，可进行药敏试验及初步菌种鉴定。 缺点：价格昂贵，需进口专利液体培养基，且有放射性污染，正逐渐被非放射性的培养方法所替代。 第三十七页，共八十一页。 几种常见分枝杆菌快速培养仪 Bectec-tb960全自动快速细菌培养系统是将荧光物质包埋在7H9液体培养管的底部，分枝杆菌生长过程中，O被消耗，底物产生荧光，仪器通过测定荧光强度，用生长指数来表示测定结果，培养时间通常需要7~42天。 特点：简便、快速，可进行药敏试验及初步菌种鉴定。连续测定荧光强度，每60分钟自动测一次，无放射性污染。 第三十八页，共八十一页。 几种常见分枝杆菌快速培养仪 Bect/alert 3D全自动快速细菌培养仪，分枝杆菌生长过程中代谢产生CO2， CO2的产生使瓶底颜色感受器产生不同的颜色变化。通过比色传感器来测定， CO2产生的速率和总量与细菌生长的速率和总量一致。 简便、快速，可进行药敏试验及初步菌种鉴定。既能进行分枝杆菌培养，又能进行普通菌培养，每10分钟自动测一次，无放射性污染。 第三十九页，共八十一页。 药物敏感性测定的重要意义 临床治疗的重要参考 流行病学的重要指标 第四十页，共八十一页。 分枝杆菌药敏试验 在条件具备和有一定经验的实验室方可进行此项试验。 下列情况可进行分枝杆菌药物敏感性试验： 初始结核病人观察起始耐药菌感染 复发结核病人 痰菌阴转后复阳者 化疗3~6个月痰菌持续阳性者 痰菌减少后又持续增加者 细菌流行病学检查 非结核分枝杆菌病等 第四十一页，共八十一页。 药物敏感性试验常用标准方法 绝对浓度法是由G. Meissner (德国) 于1964年首先提出的,是我国30 多年来一直沿用的药敏试验方法。 比例法是由法国的G. Canetti 和J.Grossete于1963