急性分离大鼠心室肌细胞的Ca2电流和细胞内Ca2浓度（行业资料）.docVIP

急性分离大鼠心室肌细胞的Ca2电流和细胞内Ca2浓度（行业资料） 文档信息 ： 文档作为关于“行业资料”中“医学资料”的参考范文，为解决如何写好实用应用文、正确编写文案格式、内容素材摘取等相关工作提供支持。正文10255字，doc格式，可编辑。质优实惠，欢迎下载！ 目录 TOC \o 1-9 \h \z \u 目录 1 正文 1 文1：急性分离大鼠心室肌细胞的Ca2电流和细胞内Ca2浓度 1 1材料与方法 2 文2：急性分离大鼠心室肌细胞的Ca2电流和细胞内Ca2浓度 8 1材料与方法 8 参考文摘引言： 14 原创性声明（模板） 15 文章致谢（模板） 15 正文 急性分离大鼠心室肌细胞的Ca2电流和细胞内Ca2浓度（行业资料） 文1：急性分离大鼠心室肌细胞的Ca2电流和细胞内Ca2浓度 成年大鼠心室肌细胞的急性分离是心肌功能研究的常用技术，以往的分离方法步骤多，时间较长，消化酶用量较大[13]。笔者介绍一种更为简便实用的改良Langendroff法，经主动脉消化酶恒流循环灌流的成年大鼠心室肌细胞的急性分离技术，并应用全细胞膜片钳技术记录心室肌细胞的Ca2+电流(ICa)以及异丙肾上腺素对ICa的影响以检测其电生理学特性，通过观察电刺激对心室肌细胞胞内Ca2+浓度([Ca2+]i)的影响实验，介绍细胞动态荧光成像系统的使用方法。 1材料与方法 材料 ，雄性，体质量250~300 g(上海斯莱克实验动物有限公司) (1750 U/mL，美国Gibicol公司)，蛋白酶ⅩⅣ( mg/mL，美国Sigma公司)。河豚毒(TTX，美国Calbiochen公司)。异丙肾上腺素(Iso，美国Sigma公司)。Fura2AM，20%Pluronic酸(美国Molucular Probe公司)。膜片钳放大器(Axopatch200B，美国Axon公司)，电流信号用Clampex 和Clampfit 软件(美国Axon公司)记录和分析。动态细胞荧光成像系统组成:DeltaRAM X高速荧光光源(美国PTI公司)，CCD(电荷藕合器件图像传感器（Charge Coupled device，CCD，CoolSnap ES，德国Roper Scientific公司)，光电倍增管(PMT，美国PTI公司)，荧光图像或荧光强度分别用ImageMaster 和FeliX 32软件记录与分析(美国PTI公司)。倒置显微镜(T2000U，日本Nikon公司)，超级荧光型油镜(CFI S Fluor 40×油镜，数值孔径为，日本Nikon公司) 方法 (250 IU/100 g)，5 min后氨基甲酸乙酯(1 g/kg)腹腔麻醉。迅速开胸摘取心脏，置盛有37 ℃预热的台氏液100 mL的培养皿中。台氏液成分如下(mmol/L):137 NaCl，2 CaCl2， KCl，1 MgCl2，10 glucose和10 Hepes(pH )。清洗血液，剪除残余肺叶与脂肪组织，迅速行主动脉插管。将心脏悬挂于Langendroff灌流装置上，结扎主动脉于插管上。采用恒流泵(6 mL/min)经主动脉插管逆向灌流冠脉血管床，先用无Ca2+台氏液灌流3~5 min，冲洗心室内残留的血液，换用含胶原酶I 20 mL和蛋白酶ⅩⅣ的无Ca2+台氏液循环灌流12 min，最后用含 mmol/L Ca2+台氏液灌流5 min冲洗消化酶，剪下心室，放入37 ℃预热的含 mmol/L Ca2+台氏液20 mL的培养皿中，用眼科剪剪开心室，并将心室在溶液中轻轻晃动以分散已解离的心室肌细胞。上述过程使用的灌流液需通入纯氧充分饱和，分离所得的心室肌细胞在室温(22 ℃) mmol/L Ca2+台氏液中可存活8~10 h。实验时用吸管把心室肌细胞混悬液加入含2 mmol/L Ca2+台氏液培养皿中，5 min后心室肌细胞即可贴壁，进行全细胞膜片钳记录，或细胞Ca2+浓度检测。 。细胞外液使用台氏液，加入10 μmol/L TTX以阻断Na+通道。电极经拉制和热刨光后，其尖端的电阻为3~5 MΩ，电极内液成分为(mmol/L):105 CsCl，10 NaCl，5 MgATP，10 Hepes，20 TEACl，4 EGTA和2 CaCl2(pH )。电信号经5 kHz滤波放大后，用Clampex 和Clampfit 软件记录和分析，以观察电刺激引起的ICa以及1 μmol/L Iso对ICa的影响。 [Ca2+]i的检测 用可透膜的Ca2+敏感的荧光染料Fura2 AM检测[Ca2+]i，Fura2AM溶解于20%Pluronic酸的DSMO中。室温下，心室肌细胞在台氏液中用Fura2 AM(终浓度5 μmol/L)负载40