《《细胞工程实验》》课程教学大纲（本科）.doc

《细胞工程实验》 Cell Engineering Experiment 课程编号课程教学总学时：48 实验总学时：16 总学分：2.5 先修课程：生物化学、细胞生物学、分子生物学、遗传学等 适用专业：生物技术 一、目的与任务 细胞工程实验是生物技术本科专业的主要实验内容之一，主要训练学生掌握细胞、组织培养的基本技能和操作要领，实验方法立足于学科的专业基础和常规生物学实验室的条件，将《细胞工程》课程的理论知识、一般实验技能和科学研究的初步方法融为一体，培养学生理论联系实际、独立思考及实践动手能力。 二、实验教学的基本要求 本实验教学要求学生掌握细胞工程学研究的主要方法、基本技能。在今后工作中能独立进行包括实验室主要仪器设备的操作、培养基制备、灭菌消毒技术、细胞原代培养、细胞传代培养、植物细胞培养等研究。 三、 本课程开设的实验项目 序号 实验项目 实验内容提要 学时 实验类型 1 细胞工程实验室常用仪器设备及培养用具的清洗和灭菌 学习倒置显微镜、超净工作台、培养箱、灭菌锅等设备的使用方法；学习培养器械的清洗、包装、消毒和灭菌方法。 2 先期 2 细胞培养主要溶液的配制 学习缓冲液、培养基的配置、灭菌和分装方法 2 先期 3 烟草（番茄、拟南芥等）种子培养无菌苗 学习通过筛选培养基初步鉴定转基因植物种子或者培养后续试验的材料等 4 综合性 4 植物细胞的悬浮培养 学习植物细胞提取及培养方法 4 综合性 5 动物细胞原代培养 学习动物细胞提取及原代培养方法 4 综合性 6 动物细胞融合 学习诱导细胞融合的原理及掌握细胞融合技术 4 综合性 7 原生质体的制备 学习掌握植物细胞原生质体的分离和纯化方法 4 综合性 8 原生质体转化 学习诱导植物体细胞杂交的技术方法之一 4 综合性 9 烟草（西洋参等）发状根培养 学习发状根诱导及培养技术 4 综合性 10 转基因植（动）物基因转入鉴定 学习转基因植物外源基因转入鉴定的方法 4 验证性 试验1. 烟草（番茄、拟南芥等）种子培养无菌苗 （一）、实验原理及目的要求 种子培养是指受精后发育完全的成熟种子和发育不完全的为成熟种子的无菌培养。利用种子培养可以使远缘杂交产生的杂种败育种子，正常萌发产生第二代植株；可以打破种子休眠，特别对一些休眠期长的植物，可以作为大量生产试管苗的好材料；可以通过筛选培养基初步鉴定转基因植物种子；或者做为后续试验的材料等等。通过本次实验，要求学生学习种子培养的基本方法和步骤，掌握种子的消毒灭菌和培养方法。 （二）、材料、仪器与试剂 1、烟草（或番茄、拟南芥）种子等。 2、三角瓶、培养瓶、镊子、封口塑料、pH计、高压灭菌锅、光照培养箱、超净工作台等。 3、MS固体培养基（或筛选培养基）、70%酒精、次氯酸钠、（0.1％的Tween）、无菌水等。 （三）、方法步骤 分组配置培养基（培养基配置详见试验指导说明），接种单独完成。 1. 选取饱满完好的植物种子； 以下步骤均在超净工作台上进行。 2. 将选好的植物种子放入100mL的三角瓶中，加入70％的酒精浸泡不超过1min ； 3. 沥去酒精后，加入15％的次氯酸钠消毒10分钟（因品种而异，一般在8-15min）； 4. 沥去消毒液后，用无菌水冲洗3~4次。 5. 沥干水份，倒入灭菌滤纸中吸水，将种子均匀植入MS固体培养基中（转基因种子植入筛选培养基中），24℃，光强1500lx，光照16h/d。 （四）、作业 1.将本次实验过程及结果整理成实验报告 2.在种子培养的无菌操作过程中需要注意哪些？ 试验2. 植物细胞的悬浮培养 实验原理及目的要求 植物细胞的悬浮培养是将植物游离的单细胞或细胞团按照一定的细胞密度悬浮在液体培养基中进行培养。将外植体离体培养获得的疏松型的愈伤组织悬浮在液体培养基中，并在摇床上震荡培养一段时间后，可形成分散悬浮培养物，将其调节到适宜密度进行培养。如从植物器官或组织开始建立细胞悬浮培养体系，包括愈伤组织的诱导、继代培养、单细胞分离和悬浮培养。对于多数悬浮培养物，细胞在培养到18-25天时达到最大密度。这项实验技术广泛应用于细胞的遗传、凋亡等研究工作，及基因工程在植物细胞水平上的操作等。通过本次试验，学习并掌握植物细胞悬浮培养的方法和技术。 （二）、材料、仪器与试剂 1、植物（烟草、拟南芥、番茄等）愈伤组织 2、超净工作台、高压灭菌锅、旋转式摇床、水浴锅、倒置显微镜、pH计、移液器、恒温培养室等。3、MS培养基、植物激素如2,4-D、酚藏红花等。 （三）、方法步骤 分组配置培养基（培养基配置详见试验指导说明），操作培养单独完成。 愈伤组织的诱导和获得 以植物胚小叶（或利用实验1的材料）为外植体，培养在含激素的MS培养基上，诱导愈伤组织。 在无菌条件下，