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全球标准化ADVIA Centaur 总维生素D 检测的性能参数 引言： 维生素D 代谢物（25[OH]D ）的检测和监测对于怀疑维生素D 不足或缺乏的患者是至关重要的，检测结果会有 助于评估基础疾病及对骨代谢的影响。众多商业体外诊断设备制造商，商业实验室和研究实验室已经研发出总 25(OH)D 的检测(即25 [OH] D2 和25[OH]D3 的浓度之和)。然而，不同方法学之间检测值不完全一致使专家产 生了疑问，哪种检测方法才能比较准确的反映患者体内的代谢水平。或者说更重要的，患者在不同时间和地点的 随访可能会由于这种差异潜在的影响纵向比较结果，方法学之间缺乏标准化引起了医生的关注。 基于上述原因，2010 年11 月美国国立卫生研究院的膳食补充剂办公室(ODS)创立了维生素D 的标准化程序 (VDSP)。美国国家标准和技术研究所(NIST)，美国疾病控制和预防中心(CDC)，和根特大学(根特,比利时)作为协 作单位，该项目的目的是为实验室和制造商提供维生素D 检测的标准品及标准化流程。为了完善这个项目，制造 商和实验室可以参加由CDC 管辖的认证过程：维生素D 标准化认证程序(VDSCP)。CDC 实验室标准化网站可 以访问： 西门子医学诊断公司作为VDSP 的先行者，意识到了溯源至维生素D 参考测量程序- VDSP 参考程序的重要性。 西门子通过重新规范ADVIA Centaur®总维生素D 检测(本文简称VitD-RMP)达到了这个目标。同时，西门子医 学诊断公司于2014 年2 月成为了首批拿到认证的六家公司之一。只有西门子和另一个商业方法是自动免疫分 析，且Vit D-RMP 也是其中的佼佼者。本文将体现CDC 认证的RMP 标准化的性能特点。 研究结果： 评价标准是确定VitD- RMP 的空白限(LOB),检测限(LOD),定量限(LOQ), 20% 总不精密度(CV%)定量限,稀释线性 关系，回收率，精密度。研究新RMP 标准化的试剂盒与根特25(OH)D RMP(根特RMP),这是一个ID- LC/MS/MS 的方法。试验还应用美国CAP 和欧洲维生素D 室间质评(DEQAS)进行评估。最后，根据VDSCP 规 范进行评价。所有研究均用于评估标准化为根特RMP 的ADVIA Centaur 总维生素D 试剂盒。 性能特征：LoB ,LoD 和LoQ LoB, LoD 和LoQ 是在原始溯源方法时建立的(即校准到其他方法而非根特RMP 时建立的)。研究表明标准化为 RMP 对于所建立的性能值没有重大改变。使用五种酸和活性炭对人血清样本进行处理，使样本中含有很少或没 有维生素D 确定了VitD–RMP 的LoB 为1.2ng/mL。但由于在非RMP 观察到的最大LoB 为1.69，因此，保留了 最初建立的LoB(1.7ng/mL)。 通过稀释低浓度维生素D 水平患者的血清获得6 份低水平维生素D 样本确定LoD 为2.3ng/mL 。根特RMP 提供 的血清样本浓度为5.04ng/mL 到60ng/mL，根据原始溯源方法建立的3.2ng/mL 为可检测出最低浓度。因此，如 同LoB，我们保留了原始溯源方法建立的LoD：3.2ng/mL 。 LoQ 是CV 在20% 的最低测量值。应用两批号试剂独立检测和共同检测的二次拟合，最大的值3.8ng/mL 作为 LoQ(图1)。但为了与偏高的LoB，LoD 保持一致，仍保留较高的原始溯源建立的4.2 ng/mL 作为LoD，在此水 平的CV 为18-19%。在LoQ 附近值略低的不精密度可以为根特RMP 最低浓度样本(5.04 ng/mL)提供更加准确 的检测值。 图1：两批号试剂独立检测和共同检测的二次拟合 试剂线性 通过高浓度样本(180ng/mL, 高于现有报道的试剂检测范围)的一系列稀释和低浓度接近2.92ng/mL(LoD)来建立线 性。跨越试剂检测范围的稀释样本在同一平台检测三次，并应用2 个不同批号试剂。每个样本的期望值和实际检 测值的差异小于10%，提示在试剂检测范围内良好的线性和CV%。使用恒定CV%的加权最小二乘法线性回归 分析来确定期望值范围内的线性(图2) 。 图2 ：使用加权线性回归评估最低到最高浓度样本的平均观察值（y ）与预期(X)结果。结果只显示了其中一个试 剂批号，但代表所有结果。线性结果也适用于第二个批号试剂：0.03+99X 超检测上限样本的稀释 虽然维生素D 中毒很少发生，但患者通过处方药或者自服药补充过度导致的中毒也可能发生。维生素D 中毒会 导致高钙血症，骨骼，软组织，肾脏，心脏的损伤。维生素D 水平大于150ng/mL 考虑