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第2节第1课时
微生物的基本培养技术; 向经过杀菌处理的牛奶中添加某些对人体有益的细菌,再经过发酵就可以制成酸奶。由于制作工艺并不复杂,一些人会在家里自制酸奶。自制酸奶虽然方便,但是食用自制酸奶导致肠胃不适的事例屡见不鲜,主要原因是在制作过程中有杂菌混入。那么,怎样才能保证无处不在的杂菌不混入发酵物中呢?;本节聚焦;一、培养基的配制;氮源;①目的要明确:配制时应根据微生物的种类、培养目的等确定配制的培养基种类。
②营养要协调:注意各种营养物质的浓度和比例。
③pH要适宜:培养不同微生物所需pH不同,细菌为6.5~7.5,放线菌为7.5~8.5,真菌为5.0~6.0。;;4.培养基的类型;(2)液体培养基;半固体培养基,如果把少量的凝固剂加入到液体培养基中,就制成了半固体培养基。以琼脂为例,它的用量在0.2~0.7%之间。这种培养基有时可用来观察微生物的动力,有时用来保藏菌种。;二、无菌技术;二、无菌技术;③为避免周围环境中微生物的污染,实验操作应在酒精灯火焰附近进行
④实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围的物品相接触;项目;消毒 日常生活中经常用到煮沸消毒法。在100℃煮沸5~6min,可以杀死微生物的营养细胞和一部分芽孢。对于一些不耐高温的液体,如牛奶,则可使用巴氏消毒法,即62~65℃消毒30min或80~90℃处理30s~1min,可以杀死牛奶中的绝大多数微生物,并且不破坏牛奶的营养成分。此外,人们也常使用化学药物进行消毒,如用酒精擦拭双手、用氯气消毒水源等。除了以上方法,还常用紫外线进行消毒。例如,接种室、接种箱或超净工作台,在使用前,可以用紫外线照射30min,以杀死物体表面或空气中的微生物。在照射前,适量喷洒石炭酸或煤酚皂溶液等消毒液,可以加强消毒效果。;湿热灭菌 这是一种利用沸水、流通蒸汽或高压蒸汽进行灭菌的方法。其中高压蒸汽灭菌的效果最好。实验室常用的高压蒸汽灭菌锅就是以水蒸气为介质,在压力为100kPa、温度为121℃的条件下,维持15~30min来灭菌的。
干热灭菌 将灭菌物品放入密闭容器如干热灭菌箱,在160~170℃的热空气中维持2~3h可以达到灭菌的目的。耐高温的???需要保持干燥的物品,如玻璃器皿(如吸管、培养皿)、金属用具等,可以采用这种方法灭菌。
灼烧灭菌 将微生物的接种工具,如涂布器、接种环、接种针或其他金属用具,直接在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧,可以迅速彻底地灭菌(见下图)。此外,在接种过程中,试管口、瓶口等容易被污染的部位,也可以通过火焰灼烧来灭菌。;1.无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来微生物污染外,还有什么目的?;三、微生物的纯培养;1.在未接种的培养基表面是否有菌落生长?如果有,说明了什么? ;在接种酵母菌的培养基上可观察到单菌落。如果培养基上生长的菌落的颜色、形状、大小基本一致,并符合酵母菌菌落的特点,则说明纯化酵母菌的操作成功;如果培养基上出现了其他形态的菌落,则说明在纯化过程中,无菌操作还未达到要求,可能所用菌液不纯,或者在实验操作过程中被杂菌污染。;课堂练习;2.将同一土壤样本经灭菌和未灭菌处理后分别放在两个培养皿中,在土壤表面分别放3张废纸(主要成分是纤维素)。然后将两个培养皿放在有较高湿度的培养室中4~6周后观察两个培养皿的变化情况(如下图)。下列相关叙述错误的是( );3.下图是采用纯化微生物培养的两种接种方法接种后培养的效果图,据图分析不正确的是( );4.下列有关细菌纯培养的说法,不正确的是( )
A. 实验操作者接种前要用70%的酒精棉球擦手消毒
B. 每次划线后接种环要在酒精灯火焰上灼烧灭菌
C. 培养基上的单个菌落都是一个细菌细胞的克隆
D. 菌液梯度稀释后用涂布法接种,得到单菌落便于计数;备用工具资料;3.下图是采用纯化微生物培养的两种接种方法接种后培养的效果图,据图分析不正确的是( );课堂练习;;①目的要明确:配制时应根据微生物的种类、培养目的等确定配制的培养基种类。
②营养要协调:注意各种营养物质的浓度和比例。
③pH要适宜:培养不同微生物所需pH不同,细菌为6.5~7.5,放线菌为7.5~8.5,真菌为5.0~6.0。;本节聚焦;一、培养基的配制;;;谢
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