新教材高中生物选择性必修3精品课件2：3 1 2 DNA的粗提取与鉴定(人教版).pptxVIP

DNA的粗提取与鉴定教材分析旧教材新教材教材分析课程标准5.1基因工程是一种重组DNA技术5.1.2阐明DNA重组技术的实现需要利用限制性内切核酸酶、DNA连接酶和载体三种基本工具 为帮助学生达成对选择性必修课程概念5的理解，促进学生生物学学科核心素养的提升，应开展下列教学活动：( 1 )DNA的提取和鉴定；( 2）利用聚合酶链式反应(PCR)扩增DNA片段并完成电泳鉴定，或运用软件进行虚拟PCR实验。5.1.3阐明基因工程的基本操作程序主要包括目的基因的获取、基因表达载体的构建、目的基因导入受体细胞和目的基因及其表达产物的检测鉴定等步骤第3章第1节基本工具DNA的粗提取与鉴定第3章第2节基本操作程序转基因番木瓜的培育新课导入DNA的提取获取目的基因华农一号构建重组DNA分子导入受体细胞并筛选目的基因的表达及筛选DNA提取的总原则保证DNA结构的完整性DNA的纯度可以满足下游操作的要求 （1）其他生物分子如蛋白质、多糖和脂质分子的污染应降至最低 （2）其他核酸分子，如RNA，也应尽量去除3. DNA分子应该有足够的量DNA的理化性质DNA分子是极性化合物，溶于水，不溶于乙醇在酸性溶液中DNA易水解，在中性或弱碱性溶液中较稳定DNA分子在不同浓度的NaCl溶液中的溶解度不同原理研磨组织SDS（十二烷基硫酸钠）EDTA（乙二胺四乙酸）Tris（三羟甲基氨基甲烷）研磨液原理研磨组织SDS（十二烷基硫酸钠）EDTA（乙二胺四乙酸）Tris（三羟甲基氨基甲烷）研磨液原理研磨组织SDS（十二烷基硫酸钠）EDTA（乙二胺四乙酸）Tris（三羟甲基氨基甲烷）研磨液原理研磨组织SDS（十二烷基硫酸钠）EDTA（乙二胺四乙酸）Tris（三羟甲基氨基甲烷）研磨液DNP（脱氧核糖核蛋白）乙醇粗提取DNA原理研磨组织SDS（十二烷基硫酸钠）EDTA（乙二胺四乙酸）Tris（三羟甲基氨基甲烷）研磨液DNP（脱氧核糖核蛋白）乙醇粗提取DNA原理研磨组织SDS（十二烷基硫酸钠）EDTA（乙二胺四乙酸）Tris（三羟甲基氨基甲烷）研磨液DNP（脱氧核糖核蛋白）乙醇粗提取DNA2mol/L的NaCl粗提取DNA溶液材料洋葱花菜香蕉鱼白猪肝鸡血材料花菜、研磨液、95%的酒精、2mol/L的NaCl溶液用具烧杯量筒玻璃棒研钵纱布漏斗试管试管架剪刀用具离心机 电子天平用具离心机 电子天平方法步骤1. 用天平称取约30g的花菜2. 将称取好的花菜倒入研钵中3. 量取10mL研磨液，倒入研钵中4. 充分研磨5. 将花菜研磨液过滤到烧杯中6. 将研磨液倒入塑料离心管中7. 在1500r/min的转速下离心5min8. 将上清液倒入烧杯中9. 在上清液中加入体积相等的、预冷的95%的酒精10. 静置2-3min粗提取的DNA11. 玻璃棒沿一个方向搅拌，卷起丝状物 “家庭版”DNA的粗提取如何设计？洗洁精(含SDS)食盐嫩肉粉(含木瓜蛋白酶)高度酒“家庭版”DNA的粗提取参考方案1.取一段长约2cm的去皮香蕉，剪碎置于玻璃杯中；2.加入10mL温水，2g食盐，5滴洗洁精，充分研磨；3.用双层纱布过滤研磨液，收集滤液；4.向滤液中加入2g嫩肉粉，混合均匀；5.将滤液置于55-60℃的水浴中加热5-10min；6.冷却，加入等体积、冷却的高度酒；7.静置2-3min，用玻璃棒（或筷子）挑取白色絮状析出物。原理DNA在酸性条件下加热水解生成脱氧核糖，而脱氧核糖进一步脱水生成ω-羟基-γ-酮基戊醛，后者与二苯胺试剂反应生成蓝色物质。二苯胺△脱氧核糖+ H+ ω-羟基-γ-酮基戊醛蓝色产物H方法步骤1. 向两支试管中各加入2mol/L的NaCl溶液5mL2. 将丝状物溶于其中一支试管，并做好标记3. 向两支试管中各加入4mL的二苯胺试剂，混合均匀 4. 置于沸水中加热5min以上鉴定结果实验组 对照组实验组 对照组DNA的粗提取与鉴定常见问题与对策材料不新鲜或反复冻融未很好抑制内源DNA酶的活性提取过程操作过于剧烈，DNA被机械打断外源DNA酶污染DNA降解导致没有提取出白色丝状物1尽量取新鲜材料，低温保存材料避免反复冻融。冰冻生物材料，应在解冻前进行剪切和研磨；适当增加研磨液中EDTA的含量。细胞裂解后的后续操作应尽量轻柔。DNA的粗提取与鉴定常见问题与对策DNA提取量少导致实验组的鉴定结果与对照组无差别实验材料不佳或量少研磨或裂解不充分析出不完全2尽量选用新鲜、幼嫩的材料，并适当增加材料用量研磨时用力均匀快速，时间适当延长，对于植物组织可加入纤维素酶低温析出，延长沉淀时间DNA的粗提取与鉴定常见问题与对策蛋白质多糖RNA… 粗提取的DNA中可能含有的杂质？3备用工具资料DNA的粗提取与鉴定常见问题与对策DNA提取量少导致实验组的鉴定结果与对照组无差别