新教材高中生物选择性必修3精品课件2：3 2 1 目的基因的筛选与获取、基因表达载体的构建(人教版).pptxVIP

第2节第1课时目的基因的筛选与获取、基因表达载体的构建基因工程的基本操作程序基因表达载体的构建将目的基因导入受体细胞目的基因的筛选与获取目的基因的检测与鉴定第二步第一步第三步第四步第一步目的基因的筛选与获取一、目的基因在基因工程的设计和操作中，用于改变受体细胞性状或获得预期表达产物等的基因。1.概念：主要指的是编码蛋白质的基因，也可以是一些具有调控作用的因子。基因结构：与生物抗逆性、优良品质、生产药物、毒物降解和工业用酶等相关的基因。（Bt基因：转基因抗虫棉）2.实例：原核细胞的基因结构真核细胞的基因结构补充知识：基因结构：原核生物基因非编码区非编码区编码区终止子：终止转录启动子：RNA聚合酶的识别和结合位点 开始转录编码区：编码蛋白质的合成组成：编码区上游与编码区下游功能：不能编码蛋白质，调控遗传信息的表达启动子：RNA聚合酶结合位点 转录起始的信号终止子：终止RNA的合成非编码区：外显子： 能编码蛋白质的序列编码区：内含子： 不能编码蛋白质的序列非编码区：不编码蛋白质,能调控遗传信息表达真核细胞的基因非编码区非编码区编码区启动子终止子12345与RNA聚合酶结合位点外显子内含子转 录mRNA前体加 工成熟mRNA原核细胞与真核细胞的基因结构比较原核细胞真核细胞不同点编码区是_______的编码区是间隔的、________的相同点都由能够编码蛋白质的________和具有调控作用的________区组成的不连续连续非编码编码区注意1、非编码序列：包括非编码区和内含子思考2、编码相同数目氨基酸的蛋白质，原核细胞与真核细胞基因 结构一样长吗？二、筛选合适的目的基因三、目的基因获取方法（一）从基因文库中获取；（二）人工合成（三）利用PCR技术获取和扩增；三、目的基因获取方法（一）从基因文库中获取目的基因基因文库概念基因文库类型21 将含有某种生物不同基因的许多DNA片段，导入到受体菌的群体中储存，各个受体菌分别含有这种生物的不同基因，称为基因文库。基因组文库部分基因文库（包含一种生物的所有基因）（包含一种生物的一部分基因）（cDNA文库）提取某种生物的全部DNA用适当的限制酶切割基因组文库的构建3多个一定大小的DNA片段将DNA片段与载体连接，导入受体菌中储存构建基因组文库某种生物的单链mRNA部分基因文库（如cDNA文库）构建 逆转录酶催化单链互补DNADNA聚合酶催化双链cDNA片段与载体连接导入受体菌中储存构建cDNA文库某种生物的单链mRNA部分基因文库（如cDNA文库）构建 逆转录酶催化单链互补DNADNA聚合酶催化双链cDNA片段与载体连接导入受体菌中储存构建cDNA文库 基因文库的构建过程某种生物某个时期的mRNA某生物体内全部DNA 反转录限制酶cDNA许多DNA片段与运载体连接导入与运载体连接导入受体菌群体受体菌群体基因组文库部分基因文库（cDNA文库）文库类型cDNA文库基因组文库文库大小基因中启动子基因中内含子基因多少物种间基因交流基因组文库和部分基因文库的比较4小大无有无有某种生物的部分基因某种生物的全部基因可以部分基因可以（二）利用PCR获取和扩增目的基因PCR是聚合酶链式反应的缩写。它是一项根据DNA半保留复制的原理，在体外提供参与DNA复制的各种组分与反应条件，对目的基因的核苷酸序列进行大量复制的技术。概念条件扩增方式：132DNA复制所需的基本条件参与的组分在DNA复制中的作用解旋酶（体外用高温代替）打开DNA双链DNA两条母链提供DNA复制的模板4种脱氧核苷酸合成DNA子链的原料DNA聚合酶催化合成DNA子链与两条母链结合的2种引物使DNA聚合酶能够从引物3′端开始连接脱氧核苷酸2n以指数方式扩增，即____（n为扩增循环的次数）扩增过程：4扩增过程：4扩增过程：4PCR扩增的计算：（1）若开始只有一个DNA提供模板，则循环n次后获得的子代DNA数目为 个。（2）若开始有N0个DNA提供模板，则循环n次后获得的子代DNA数目为 个。2nN0?2nPCR技术扩增与DNA复制的比较DNA复制PCR技术场所解旋方式酶主要在细胞核内体外复制解旋酶高温细胞内的DNA聚合酶热稳定的DNA聚合酶1） DNA聚合酶特性不能从头合成DNA，只有当引物与DNA母链通过碱基互补配对结合后， DNA聚合酶才能从引物的3′端开始延伸DNA链， DNA的合成方向总是从子链的5′端向3′端延伸关于PCR的几点说明：5DNA模板，四种脱氧核苷酸，分别与两条模板链相结合的两种引物，耐高温的DNA聚合酶2) 缓冲液需要为PCR反应提供的物质3) PCR和细胞内复制的不同点PCR过程需要的引物不是RNA，而是人工合成的DNA单链，其长度通常为20－30个脱氧核苷酸PCR技术DNA复制相同点原则原料条件不同点解旋方式场所酶结果碱