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T 细胞亚群的检测 —免疫荧光法 【申请单】请完成申请单所要求项目 ×××市人民医院检验申请单 姓名 性别 门诊号 诊断或症状 检验标本 检验目的 送检科室 送检日期 年龄 住院号 医师 年 月 日 【方法选择】 表 1-1 T 细胞亚群的检测方法 方法 流式细胞术 免疫荧光法 AP-AAP 桥联酶免疫法 本次检查选择 √ 【材料准备】 1.抗 CD McaB、兔抗鼠 IgG 荧光抗体。 2.受检者肝素(或 EDTA)抗凝静脉血。 3.含 10％胎牛血清的 RPMI 1640 培养液。 4.细胞分离液。 5.细胞计数板。 6.离心机、落射荧光显微镜。 【操作方法】 1.取肝素抗凝血 1.5ml，与等量生理盐水混匀，轻轻叠加在 3ml 细胞分离液上，转速 2000r/min 离心， 离心时间 20min。吸取单个核细胞层 (PBMC)，用 RPMI1640 培养液洗涤， 1000r/min 离心 2 次，每次 10min.弃上清， 加入 RPMI1640 培养液， 配成 5×106/ml 细胞悬液。 2.按厂家说明稀释抗 CD McaB 至工作浓度，取 0. 1ml，加等量步骤 1 制好的细胞悬液， 混匀后， 4℃下静置 45min。离心弃上清，再用洗 2 次，弃上清； 3.配制合适浓度兔抗鼠 IgG 荧光抗体， 取 0. 1ml 加