药业公司洁净区房间沉降菌动态测试方案.docx

药业公司洁净区房间沉降菌动态测试方案 1测试方法 本测试方法利用沉降法，即通过自然沉降原理收集在空气中的生物粒子于培养基平皿，经若干时间，在适宜的条件下让其繁殖到可见的菌落数，以平板培养皿中的菌落数来评定洁净环境内的活微生物数，并以此来评定洁净区的洁净度。 2使用的仪器和设备 2.1高压消毒锅：使用时应严格按照操作规程进行。 2.2 恒温培养箱：必须定期对培养箱的温度计进行检定。 2.3培养皿 一般采用φ90mm×15mm硼硅酸玻璃培养皿。 使用前将培养皿置于121℃湿热灭菌30min。 3培养基：大豆酪蛋白琼脂培养基（TSA）。 将培养基加热熔化，冷却至约45℃在无菌操作条件下将培养基注入培养皿，每皿约15ml。 待琼脂培养基凝固后，将培养基平皿放入30～35℃恒温培养箱中培养48小时，若培养基平皿上确无菌落生长，即可供采样用，制备好的培养基平皿应在2～8℃的环境中存放。 4测试步骤 4.1采样方法：将已制备好的培养皿放置在预先确定取样点，打开培养皿盖，使培养基表面暴露4小时，单个沉降碟的暴露时间可以少于4 小时，同一位置可使用多个沉降碟连续进行监测并累积计数，再将培养皿盖上盖后倒置。 4.2培养 全部采样结束，将培养皿倒置于恒温培养箱中培养。 在30～35℃培养，时间不少于2天。 每批培养基应有对照试验，可每区域选定3只培养皿作对照试验，与采样皿同时操作但不需暴露采样，然后与采样后的培养皿一起放入培养箱内培养，结果应无菌落生长。 4.3菌落计数 用肉眼直接计数，然后用5～10倍放大镜检查，是否有遗漏。 若培养皿上有2个或2个以上菌落重叠，可分辨时仍以2个或2个以上的菌落计数。 5注意事项 5.1 测试用具要做灭菌处理，以确保测试的可靠性、正确性。 5.2 采取一切措施防止人为对样本的污染。 5.3 对培养基、培养条件及其他参数作详细的记录。 5.4 由于细菌种类繁多，差别甚大，计数时一般用透射光于培养皿背面或正面仔细观察，不要漏计培养皿边缘生长的菌落，必要时用显微镜鉴别。 5.5 采样前应仔细检查每个培养皿的质量，如发现变质、破损或污染的应剔除。 6 测试规则 6.1 测试状态 沉降菌测试前，被测试洁净区的温湿度须达到规定的要求，静压差必须控制在规定值内。 沉降菌测试前，被测试洁净区已经过消毒。 6.2 测试时间 对非单向流，如B级、C级、D级以上的净化房间，测试应在净化空调系统正常运行不少于30分钟开始。 6.3沉降菌计数 6.3.1采样点数目及其布置 最少采样点数目：沉降菌的最少采样点数可按下表确定。在满足最少测点数的同时，不宜满足最少培养皿数，见下表。 最少采样点数目： 面积（㎡） 洁净度级别 A 、B级 C级 D级 10 2-3 2 2 ≥10-20 4 2 2 ≥20-40 8 2 2 ≥40-100 16 4 2 ≥100-200 40 10 3 注：表中的面积，对于单向流洁净室，指的是送风面积，对于非单向流洁净室，指的是房间面积。 采样点的布置 ——工作区测试点位置离地0.8～1.5m左右（略高于工作面）。 ——可在关键设备或关键工作活动范围处增加测点，采样点的布置应力求均匀，避免采样点在某局部区域过于集中，某局部区域过于稀疏（如图3）。 6.4 记录：测试报告中应记录生产开始的时间以及测试时间、现场操作人员数量及位置、现场设备运转数量及位置、房间温度、相对湿度、压差、测试状态及测试数据。 6.5结果计算 单个沉降碟的暴露时间可以少于4 小时，同一位置可使用多个沉降碟连续进行监测并累积计数。 6.6 结果评定 6.6.1用平均菌落数判断洁净室的空气中的微生物。 6.6.2 洁净区内的平均菌落数必须符合所选定的评定标准。 6.6.3 若某洁净区的菌落数超过评定标准，则必须对此区域先行消毒，然后重新测试两次，测试结果必须合格。 测定结果见附件。 附件 洁净区沉降菌测试记录 验证记录样张 洁净级别： 测试状态： 测试人员数： 房间名称 温度（℃） 相对湿度（%） 培养皿 平均数 备注 1 2 3 4 空 白 验 证 结 果 评 定 操作人/日期： 复核人/日期：