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LabAlliace高效液相色谱系统培训教材 一、液相色谱系统的差不多原理 1、色谱法分类 按两相的物理状态可分为：气相色谱法(GC)和液相色谱法(LC) 。 气相色谱法适用于分离挥发性化合物。GC 依照固定相不同又可分为 气固色谱法(GSC)和气液色谱法(GLC)，其中以GLC 应用最广。液相 色谱法适用于分离低挥发性或非挥发性、热稳固性差的物质。LC 同 样可分为液固色谱法(LSC)和液液色谱法(LLC)。此外还有超临界流体 色谱法(SFC)，它以超临界流体（界于气体和液体之间的一种物相） 为流淌相（常用 CO ），因其扩散系数大，能专门快达到平稳，故分 2 析时刻短，专门适用于手性化合物的拆分。 按原理分为吸附色谱法(AC)、分配色谱法(DC)、离子交换色谱法 (IEC)、排阻色谱法(EC，又称分子筛、凝胶过滤(GFC)、凝胶渗透色 谱法(GPC ）和亲和色谱法。(此外还有电泳) 。 按操作形式可分为纸色谱法(PC)、薄层色谱法(TLC)、柱色谱法。 2、液相色谱理论进展简况 色谱法的分离原理是：溶于流淌相(mobile phase)中的各组分通过 固定相时，由于与固定相(stationary phase)发生作用 （吸附、分配、离 子吸引、排阻、亲和）的大小、强弱不同，在固定相中滞留时刻不同， 从而先后从固定相中流出。又称为色层法、层析法。 色谱法最早是由俄国植物学家茨维特（Tswett）在1906 年研究用 碳酸钙分离植物色素时发觉的，色谱法(Chromatography)因之得名。 后来在此基础上进展出纸色谱法、薄层色谱法、气相色谱法、液相色 谱法。 液相色谱法开始时期是用大直径的玻璃管柱在室温顺常压下用 液位差输送流淌相，称为经典液相色谱法，此方法柱效低、时刻长（常 有几个 小 时 ）。高效液相色谱法 (High performance Liquid Chromatography，HPLC)是在经典液相色谱法的基础上，于 60 年代 后期引入了气相色谱理论而迅速进展起来的。它与经典液相色谱法的 区别是填料颗粒小而平均，小颗粒具有高柱效，但会引起高阻力，需 用高压输送流淌相，故又称高压液相色谱法 (High Pressure Liquid Chromatography ，HPLC) 。又因分析速度快而称为高速液相色谱法 (High Speed Liquid Chromatography，HSLP) 。也称现代液相色谱。 3、HPLC 的特点和优点 HPLC 有以下特点： 2 2 高压—压力可达 150~300kg/cm 。色谱柱每米降压为 75 kg/cm 以上。 高速—流速为0.1~100.0 ml/min 。 高效—可达 5000 塔板每米。在一根柱中同时分离成份可达 100 种。 高灵敏度—紫外检测器灵敏度可达0.01ng 。同时消耗样品少。 HPLC与经典液相色谱相比有以下优点： 速度快—通常分析一个样品在15~30 min，有些样品甚至在5 min 内即可完成。 辨论率高—可选择固定相和流淌相以达到最佳分离成效。 灵敏度高—紫外检测器可达 0.01ng，荧光和电化学检测器可达 0.1pg。 柱子可反复使用—用一根色谱柱可分离不同的化合物。 样品量少，容易回收—样品通过色谱柱后不被破坏，能够收集单 一组分或做制备。 4、高效液相色谱分离原理 高效液相色谱法按分离机制的不同分为液固吸附色谱法、液液分 配色谱法（正相与反相）、离子交换色谱法、离子对色谱法及分子排 阻色谱法。 a．液固色谱法 使用固体吸附剂，被分离组分在色谱柱上分离 原理是依照固定相对组分吸附力大小不同而分离。分离过程是一个吸 附－解吸附的平稳过程。常用的吸附剂为硅胶或氧化铝，粒度 5~10μm。适用