周爱儒生物化学第六版.pptVIP

米氏常数的意义 （1）概念：Km值等于酶反应速度为最大速度一半时的底物浓度。 （2）Km值愈小，酶与底物亲和力愈大。亲和力大表示不需要很高的底物浓度，便可容易地达到最大反应速度。 （3）Km 是酶的特征性常数，只与酶的性质，酶所催化的底物和反应条件(温度、pH、有无抑制剂等)有关，与酶的浓度无关。 各种酶的 Km 值大致在 10-1～10-6 M 之间。 练习：已知某酶的Km值为0.05mol.L-1，要使此酶所催化的反应速度达到最大反应速度的80％时底物的浓度应为多少？ Km在实际应用中的重要意义 （1）鉴定酶：可以鉴别不同来源或相同来源但在不同发育阶段、不同生理状态下催化相同反应的酶是否为同一种酶。 （2）判断酶的最佳底物：如果一种酶可作用于多个底物,就有几个Km值，其中Km最小对应的底物就是酶的天然底物。如蔗糖酶既可催化蔗糖水解(Km=28mmol/L),也可催化棉子糖水解(Km=350mmol/L),蔗糖为天然底物。 （3）计算一定速度下的底物浓度：如某一反应要求的反应速度达到最大反应速度的99%，则[S]=99Km 米氏常数的测定 基本原则： 将米氏方程变化成直线方程，再作图求出Km。 例：双倒数作图法（Lineweaver-Burk法） 米氏方程的双倒数形式： 1 Km 1 1 — = —— . — + —— v Vmax [S] Vmax 酶动力学的双倒数图线 （二）温度与酶反应速度的关系 ? 在达到最适温度以前，反应速度随温度升高而加快 ? 酶是蛋白质，其变性速度亦随温度上升而加快 ? 酶的最适温度不是一个固定不变的常数 v 温度 最适温度：酶促反应速度最快时的环境温度。 （三）pH对酶反应速度的影响 ?过酸过碱导致酶蛋白变性 ?影响底物分子解离状态 ?影响酶分子解离状态 ?影响辅助因子的解离 pH 最适 pH v 最适pH：酶促反应速度最快时的环境pH。 （四）激活剂对酶作用的影响 类别 金属离子：K+、Na+、 Mg2+、Cu2+、Mn2+ 、 Co2+、Fe2+ 阴离子： Cl-、Br- 有机分子 还原剂：抗坏血酸、半胱氨酸、谷胱甘肽 金属螯合剂：EDTA 凡是能提高酶活性的物质，称为酶的激活剂（activator）。 （五）抑制剂对酶作用的影响 凡能使酶的催化活性下降而不引起酶蛋白变性的物质统称为酶的抑制剂（inhibitor） 。 类型：不可逆抑制剂 可逆抑制剂 应用：研制杀虫剂、药物 研究酶的作用机理，确定代谢途径 抑制剂类型和特点 竞争性抑制剂 可逆抑制剂 非竞争性抑制剂 反竞争性抑制剂 非专一性不可逆抑制剂 不可逆抑制剂 专一性不可逆抑制剂 1.非专一性不可逆抑制剂 抑制剂作用于酶分子中的一类或几类基团，这些基团中包含了必需基团，因而引起酶失活。 如：重金属对疏基酶的抑制 2.专一性不可逆抑制剂 这类抑制剂选择性强，只能专一性地与酶活性中心的某些基团不可逆结合，引起酶的活性丧失。 实例：有机磷杀虫剂 -Ser-OH -Ser-O P O-R O-R O P O-R O-R O X  + I EI ES P+ E E+S 3.竞争性抑制作用 特点：Km增大，Vm不变；抑制作用的强弱取决于底物与抑制剂浓度的相对比例；底物浓度增加到足够大，抑制作用可解除。 实例1：丙二酸对琥珀酸脱氢酶的抑制作用 实例2：磺胺药物的药用机理 H2N- -SO2NH2 对氨基苯磺酰胺 H2N- -COOH 对氨基苯甲酸 对氨基苯甲酸 谷氨酸 蝶呤 叶酸 4.非竞争性抑制作用 + I EI+S ESI ES P+ E E+S + I 特点：Km不变