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蛹虫草人工培养研究进展 　　摘要：蛹虫草作为冬虫夏草替代品，在传统中药上具有重要的药用价值。近年来，由于过度采挖，导致野生冬虫夏草资源越来越少，而蛹虫草的人工培养已初具规模。该文综述了蛹虫草的菌种选育、人工培养方式、培养基制作、接种技术、培养环境调控、子实体采收、次级代谢产物提取等环节技术的研究进度，并提出了蛹虫草人工培养的发展方向，即：以液体发酵培养实现工业化生产、降低污染率，以及提高次级代谢产物的利用率为重点。 　　关键词：蛹虫草;人工培养;研究进展 　　虫草类药材在中药上具有极高的药用价值，其中冬虫夏草的市场价值最高。近年来，由于人们对冬虫夏草的过度采挖，使其野生资源日渐稀少，市场需求远大于自然生产量。而蛹虫草作为冬虫夏草的替代品，拥有与冬虫夏草相似的药用功效，且已实现人工培养和规模化生产。傅明等以蛹虫草子实体为材料，分离纯化得到3种物质，均具有抗hiv-1蛋白酶活性[1]，且虫草素、虫草多糖等物质对于抗肿瘤、抗hiv具有重要药效，其安全性已被国家批准认可。在人工培养条件下，蛹虫草的虫草素、碳氮化合物的含量等不低于甚至高于冬虫夏草。江晓路等研究认为人工栽培蛹虫草的sod活性更高[2]。 　　目前，蛹虫草的培养方式主要有活体人工培养、人工固体培养基培养、液体发酵培养3种，技术成熟、推广应用广泛，开辟了蛹虫草新的药材资源。本文通过对蛹虫草的菌种培育、人工培养系列技术及未来研究开发重点等的探讨，为蛹虫草的大规模人工培养提供理论与技术参考。 　　1菌种选育 　　1.1菌种选育方法菌种选育是蛹虫草人工培养的关键技术环节之一。优良菌种的子实体产量，菌种的传代次数，子实体的萌发几率以及虫草素的含量等，都高于劣质种源的。大部分蛹虫草在实际生产过程中都会发生菌种退化现象，即子实体不萌发，菌种不进行生殖生长而回退到营养生长的过程，其中菌核核型的改变是大部分学者认可的菌种退化的内在原因。经相关实验证明：蛹虫草发生生殖生长回退到营养生长的现象，其实质是异核相转变成同核相所致的，异核相具有2个交配型单孢子，同核相只具备1个交配型单孢子，而只有同时拥有2个交配型单孢子子实体才能够正常生长，当蛹虫草异核相转变为同核相就会发生菌种退化现象，子实体不能生长。菌种退化也与菌种传代次数、菌种选育保存条件等诸多因素有关。造成菌核核型改变的可能因素有外部环境、物理因素、化学诱变、以及遗传等。因此，对于菌种的选育，不仅需要考虑环境、种源等外部因素，更要考虑内部遗传因素的影响。 　　目前，较为成熟的菌种选育技术有组织分离、孢子培养以及杂交育种3类。组织分离是选择优良子实体进行悬挂式分离，再接种于pda培养基鉴别优劣，并制作保存菌种的办法。孢子培养是指从蛹虫草中分离单个孢子并培养成成熟菌丝，从而获得纯菌种的方法。杂交育种是指利用蛹虫草的二极性异宗配合习性，选取优良性状菌种杂交而获得性状优良、遗传稳定的菌种选育方法。3种方法各有优劣，但以组织分离法最为简单有效、成本低，生产上大都选用此法。王艳华等通过对尖头及圆头蛹虫草组织分离和孢子分离选育研究发现，截取上部1.5cm以内的组织块分离出的菌种相对能保证转色出草，越靠近下部的出草率越低或不出草[3]。 　　1.2表型性状选育菌种技术良好的表现型性状是菌种选育的目标。袁雪芬从人工栽培的蛹虫草子实体分离得到az和bz2个群体菌株，观察其菌落形态并从中选取部分菌株进行子实体产生实验，结果表明，菌落颜色为杏橙色且气生菌丝较少的菌株经摇培后的菌丝球较小，而且密集，出草率高且产量高[4]。李光荣等通过对野生蛹虫草单孢子进行分离并进行生产子实体试验，观察与测定子实体所含虫草素含量，发现菌落背面颜色呈橙铬色的菌株容易产生子实体[5]。结合上面的方法，可以通过以下2个阶段试验选育优良菌种：第1阶段，固体培养选择菌落颜色深、气生菌丝少的菌种进入第2阶段液体摇培筛选;第2阶段，通过液体揺培，观察菌丝球形态，选择菌丝球细小、密集的菌种用作生产种。同时要注意，菌落颜色呈橙色的菌株容易产生子实体、产量较高。 　　2蛹虫草人工培养技术 　　2.1人工培养方式自1987年梁曼逸等率先以家蚕和柞蚕为寄主培养蛹虫草，获得了与天然蛹虫草相似的子实体[6]，随后柞座蛹、蚕蛹等蛹虫草的人工培养相继成功，至今已出现了3种主要的培养方式：蚕蛹接种培养、人工固体培养、液体发酵培养。3种培养方式所需原料和成本都不一样，产出产物、效率、品质的差异也十分巨大。蚕蛹接种培养是一种以活的蚕蛹为寄主，将虫草菌种注入寄主体内，给予虫草子实体生长适宜的环境条件，最终得到产物，所涉及的蚕蛹选择培育、菌种的保存培养等技术都是极为关键的环节。该方法存在许多不足与限制，如蚕蛹生长具有季节性，不适宜连续生产蛹虫草，注