血清谷丙转氨酶活性的测定.pptVIP

赖氏法测定血清谷丙转氨酶活性(ALT)的测定 【目的要求】 1.掌握血清谷丙转氨酶活性测定的基本原理。 2.熟悉血清谷丙转氨酶活性测定的具体操作方法。 3.了解血清谷丙转氨酶活性测定的临床意义。 【实验原理】 ALT催化丙氨酸与α-酮戊二酸之间的氨基转移,生成丙酮酸和谷氨酸,在37℃, pH7.4,经30min反应之后，加入2,4-二硝基苯肼终止反应,并与反应中的二种α-酮酸生成2,4-二硝基苯腙,在碱性条件下显红棕色,于波长505nm处读取A值。 两种苯腙的吸收光谱曲线在500~520nm处差异最大,丙酮酸苯腙的呈色强度是α-酮戊二酸苯腙的3倍,据此可以计算出丙酮酸的生成量,后者与血清中的ALT的活性浓度成正比。 【实验原理】 丙氨酸+ α-酮戊二酸 丙酮酸+谷氨酸 ALT 2,4-二硝基苯肼 α-酮戊二酸-2,4-二硝基苯腙 丙酮酸-2,4-二硝基苯腙 0. 4mol/LNaOH 红棕色 红棕色（三倍） 卡门单位:1ml血清在25℃,340nm,体积为3ml,光径为1cm每分钟光密度下降的酶量。 1、主要器具 微量移液器 【实验仪器】 可见分光光度计 【实验试剂】 1．0.1mol/L磷酸盐缓冲液（pH7.4） 2．基质缓冲液 精确称取D-L-丙氨酸1.79g