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蓝白筛选原理 蓝白斑筛选是一种基因工程常用的重组菌筛选方法。 野生型大肠杆菌产生的β-半乳糖苷酶可以将无色化合物x-gal(5-溴-4-氯-3-吲哚-β-d-半乳糖苷)切割成半乳糖和深蓝色的物质5-溴-4-靛蓝。有色物质可以使整个培养菌落产生颜色变化，而颜色变化是鉴定和筛选的最直观有效的方法。 设计适用于于蓝白斑甄选的基因工程菌为β-半乳糖苷酶瑕疵型菌株。这种宿主菌的染色体基因组中编码β-半乳糖苷酶的基因突变，导致其编码的β-半乳糖苷酶丧失正常n段一个146个氨基酸的长肽（即为α肽链），从而不具备生物活性，即为无法促进作用于x-gal产生蓝色物质。用作蓝白斑甄选的载体具备一段称作lacz的基因，lacz中包含：一段β-半乳糖苷酶的启动子；编码α肽链的区段；一个多克隆位点(mcs)。mcs坐落于编码α肽链的区段中，就是外源dna的选择性填入位点，但其本身不影响载体编码α肽链的功能活性。虽然上述瑕疵株基因组无法单独编码存有活性的β-半乳糖苷酶，但当菌体中所含拎lacz的质粒后，质粒lacz基因编码的α肽链和菌株基因组抒发的ｎ端的瑕疵的β-半乳糖苷酶突变体优势互补，具备与完备β-半乳糖苷酶相同的促进作用x-gal分解成蓝色物质的能力，这种现象即为α-优势互补。 操作中，添加iptg(异丙基硫代-β-ｄ-半乳糖苷)以激活lacz中的β-半乳糖苷酶的启动子，在