细菌超广谱β-内酰胺酶与耐药性.pptVIP

主讲人：华耀 细菌超广谱β－内酰胺酶与耐药性 1、什么是β－内酰胺类抗生素？ 2、什么是β－内酰胺酶？ 3、什么是超广谱β－内酰胺酶？ 4、它们与细菌耐药有什么关系？ ？ 一、β－内酰胺类抗生素 青霉素发现者、英国科学家弗莱明（1928） （一）概念 β-内酰胺类抗生素（β-lactams）指化学结构中具有β-内酰胺环的一大类抗生素。 (二) β－内酰胺类抗生素抑制细菌的机理 N-乙酰葡萄糖胺 双糖十肽 转肽酶 N-乙酰胞壁酸五肽 聚合物 （PBPs） 粘肽（构成细胞壁） β－内酰胺类抗生素 （－） 胞浆内 细胞膜 细胞膜外 细胞壁合成受阻，细胞壁缺损，外环境水分渗入到菌体，菌体膨胀裂解而死。 二、β－内酰胺酶 （一）概念 β-内酰胺酶（β-lactamase）是细菌产生的可水解β-内酰胺类抗生素的酶。 绝大多数常见的β-内酰胺酶有一个依赖丝氨酸发挥作用的机制。通常它们的活性位点具有一个狭窄的纵形沟状结构，在沟的底部形成了一个空腔（氧阴离子袋），这种疏松的构造容易弯曲，便于结合底物。 （二）、β-内酰胺酶是细菌耐药的机理 丝氨酸的结构式 β-内酰胺环上的羰基碳在结合β内酰胺酶活性部位的丝氨酸时发生了不可逆的反应，结果使其成为开环物。 （三）β-内酰胺酶分类方法 一、Bush-M-J分类法（功能分类法） 根据β-内酰胺酶的功能相似性（底物和抑制物的轮廓）分为1 ，2 ，3 ，4 四组，其中2组和3组又分为很多亚组。 二、Ambler分类法（分子分类法） 根据酶的氨基酸序列的保守性和相似性将β-内酰胺酶分为A，B，C，D四组。 克拉维酸 三、超广谱β- 内酰胺酶 （一）概念 超广谱β- 内酰胺酶(extended spectrum beta - lactamases , ESBLs) 是由质粒介导的能赋予细菌对多种β- 内酰胺类抗生素和单酰胺环类抗生素耐药并可被 β-内酰胺酶抑制剂所抑制的一类 β-内酰胺酶. (二)超广谱β- 内酰胺酶特点 （1）主要是有质粒介导 ESBLs 基因由质粒介导, 可通过接合、转化和转导等形式在细菌间扩散。 （2）产超广谱β- 内酰胺酶主要是革兰氏阴性菌 如：大肠埃希菌属、肺炎克雷伯菌、奇异变形杆菌 （3）能被β- 内酰胺酶抑制剂所抑制 如：CA（克拉维酸）、甲氧西林 （1）TEM型 ESBLs TEM 型 ESBLs 由 TEM- 1 衍化而来。在 TEM 家族中 TEM- 3 是第一个显示 ESBLs 特点的 TEM 型 β- 内酰胺酶。TEM 型 ESBLs 的形成是因为238位甘氨酸突变为丝氨酸所形成的。这种突变提高了对头孢噻肟的水解能力。 2005 年发现的 TEM- 94发生了104,238 氨基酸位点的改变, 药敏实验证实其对头孢泊肟和头孢噻肟耐药。 （三）超广谱内酰胺酶类型 目前发现的超广谱 β- 内 酰 胺 酶 种类已超过 200 多种, 其类型可以分为 TEM 型、SHV 型、OXA 型、CTX- M 型、其它型等 5 类。其中 TEM和 SHV 型酶是临床上较常见的超广谱 β- 内酰胺酶。 （2 ）SHV 型 ESBLs SHV 型 ESBLs 是由 SHV- 1 衍化而来。SHV 家族中第一个 SHV 型 ESBLs 是 SHV- 2。SHV- 2 发生了 Gly- 238- Ser 位点的突变, 这增加了对氧亚氨基类抗生素的亲和力和水解能力。 对比其它的 SHV 型 ESBLs 氨基酸序列分析发现, 氨基酸的突变主要集中在 179, 238, 240, 205 位点。 （三）ESBLs的检测方法1、标准纸片扩散法 （1）表型初筛试验 按标准纸片扩散法操作，当下述抗菌药物的抑菌环直径头孢泊肟(10μg)≤17mm 或头孢他啶(30μg)≤22mm 或氨曲南(30μg)≤27mm 或头孢噻肟(30μg)≤27mm或头孢曲松(30μg)≤25mm时，提示为可疑产ESBLs菌株。 （2） 表型确证试验 使用头孢他啶(30μg)和头孢他啶/克拉维酸(30/10μg)及头孢噻肟(30μg