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葡聚糖凝胶柱使用及注意事项 包含各种溶剂的溶胀系数 葡聚糖凝胶柱使用及注意事项包含各种溶剂的溶胀系数 葡聚糖凝胶柱使用及注意事项lpar;包含各种溶剂的溶胀系数rpar; 葡聚糖凝胶柱采用及注意事项 1sephadexg型葡聚糖凝胶只适合在水中使用，sephadexg-25羟丙化后就是sephadexlh-20。其既有分子筛作用，在由极性与非极性溶剂组成的溶剂中还有反相层析效果。虽然价位很高，但由于性能颇佳，可再生利用，所以倍受亲睐。此外上柱样品损失很少，对处理小样品较好，这也是我们实验室常用的原因之一。 2sephadexlh20的原理。 sephadexlh20的分离原理主要有两方面：以凝胶过滤作用为主，兼具反相分配的作用（在反相溶剂中）。因为凝胶过滤作用，所以大分子的化合物保留弱，先被洗脱下来，小分子的化合物保留强，最后出柱。如果使用反相溶剂洗脱，sephadexlh20对化合物还起反相分配的作用，所以极性大的化合物保留弱，先被洗脱下来，极性小的化合物保留强，后出柱。如果使用正相溶剂洗脱，这主要靠凝胶过滤作用来分离。 3sephadexlh20洗清溶剂。 看完第2点后，就应该清楚sephadexlh20洗脱溶剂因分为两类：反相和正相两种。用得最多的是反相溶剂洗脱，以甲醇－－水系统最为常见，先用水，逐渐增加甲醇比例，最后用100％甲醇冲柱。正相系统以氯仿－－甲醇最为常见，先用50％氯仿－－甲醇，逐渐增加甲醇比例，最后用100％甲醇冲柱。 4sephadexlh20样品的处置和洗清溶剂的挑选。 如果样品极性大，这选用反相溶剂洗脱（甲醇－－水），样品用最少体积的甲醇－－水（尽可能甲醇少一些）溶解，过滤后，湿法上样（一定要滤喔！要是把sephadexlh20堵啦，就得将sephadexlh20的柱头部分弃去，很心痛呀）。如果样品极性小，这选用正相溶剂洗脱（氯仿－－甲醇），样品用最少体积的氯仿－－甲醇溶解，过滤后，湿法上样。 5sephadexlh-20的步骤。 (1)选择条件： 梯度洗清在sephadex采用中并不象在正二者柱层析中那么关键。首先你的样品仍须能够熔化在尽量少量的洗清剂中。极性在的用甲醇水系统;极性大者通常用不能含水的系统。我们实验室常用正己烷二氯甲烷甲醇系统，用了很多年，效果较好。 (2)饱和层析柱： 用洗清剂将凝胶容器，四肢柱身，使其自然下陷，此时必须避免气泡回到其中。至少半小时关上控制器，流入几个柱体种的洗清剂，目的就是并使其收缩在恰当比例的洗清剂中。 (3)样品处理：用尽量少的洗脱剂溶解样品，常压过滤。 (4)湿法上柱。这也就是必须存有技巧的步骤。 (5)洗脱：控制流速，一般1drop/s以下，可参见厂家的一些参数;必要时更改极性（很多时一个极性就可以将样品洗脱完毕）。 再造以供下次采用。 6分离的技巧，最后说说我的使用心得 （1）流速不容太快，大意不容崭新着急，所谓欲速则不达。 （2）柱子尽可能长，sephadexlh20柱长的增加将极大地改善分离，所不要吝惜填料，宁可将填料全装在一根大柱子中，不要将填料装成几根小柱。所谓集中优势兵力，打击敌人。 （3）馏分一定要接的细，可以1／10，或1／20个保留体积K817一馏分。 （4）洗脱体积一般为2-3个保留体积，对特殊保留强的化合物，可洗脱5个保留体积。 （5）鞣质成分死去溶解轻微，例如不在乎填料者，需用sephadexlh20分后鞣质。 （6）sephadexlh20对黄酮类成分的分离效果极佳，方法很成型，有大量文献参考。 （7）填料反反复复采用，每次用回去，通常需用甲醇将柱子洗脸整洁，然后用下一次拆分的起步溶剂将甲醇替代出，姜味。 sephadexlh-20是由葡聚糖g-25羟丙基化加工而成，属于分子筛凝胶，尤其适用于天然产物在有机溶剂中的纯化。例如：类固醇、萜类、脂类以及小分子多肽等，pharmadexlh-20同时适 用作分子类别非常相近的物质的拆分和工业规模的制取，既可以用作初步提纯步骤，也可以用作最终精制步骤，如非如前所述同分异构体的拆分。 装填的重要原则之一就是需要形成一个稳定均一的柱床。胶颗粒越均一（粒径分布越窄），越容易获得稳定均一的柱床。但是对于sephadexlh-20而言，25～100μm的粒径范围相对于许多用于制备色谱的填料而言，不能说分布均一，也就是说其粒径分布较宽。然而当胶溶胀后就相对容易得到均一的柱床。这对于长柱（最高至250cm）而言也是同样的。在装柱前，层析柱和储槽都必须进行彻底的清洗。