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第1页，共14页，2022年，5月20日，18点30分，星期四 Solexa技术介绍 Solexa 技术最早由两位剑桥大学的化学家创立，利用专利核心技术“DNA 簇” 和“可逆性末端终结”，达成自动化样本制备及基因组数百万个碱基大规模平行测序。 第2页，共14页，2022年，5月20日，18点30分，星期四 Solexa 的基本原理 第3页，共14页，2022年，5月20日，18点30分，星期四 扩增 “桥”结构 单链引物 第4页，共14页，2022年，5月20日，18点30分，星期四 DNA簇 第5页，共14页，2022年，5月20日，18点30分，星期四 单分子克隆 ~1000 DNA片段per ~ 1 μm “DNA簇” ~1000 “DNA簇” per 100 μm square ~40 million clusters per experiment 准备DNA片段 两端接上 adapters 将DNA片段通过adapter锚定在芯片上 循环扩增DNA片段成“DNA簇” 20 microns Sequence 第6页，共14页，2022年，5月20日，18点30分，星期四 检测 第7页，共14页，2022年，5月20日，18点30分，星期四 可逆终止反应 Reversible Terminator Chemistry O PPP HN N O O 荧光基团 3’ 保护基团 Next cycle 掺入 检测 去保护基团 去荧光基团 O DNA HN N O O 3’ O 5’ 游离3‘末端 X OH 4种标记过的核苷酸 第8页，共14页，2022年，5月20日，18点30分，星期四 Sequencing-by-Synthesis (SBS) 5’ G T C A G T C A G T C A G T 3’ 5’ C A G T C A T C A C C T A G C G T A 掺入一个碱基 Cycle 1: 加入反应体系 移除其他未掺入的核苷酸 信号检测 Cycle 2-n: 加入反应体系，循环cycle 1 1、每轮测序反应加入四种带有荧光标记的dNTP，末端带有可以被去除的保护基团 2、每轮反应只能整合一个核苷酸，仪器读取相应的荧光信号 3、信号读取结束，用化学方法去除阻断基团和荧光基团，进行下一轮测序反应 第9页，共14页，2022年，5月20日，18点30分，星期四 第10页，共14页，2022年，5月20日，18点30分，星期四
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