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南昌职业大学 体育卫生系 《食品微生物学》课程实验教学大纲《食品微生物学》课程实验教学大纲 实验一 微生物检验常规试验预备（4个学时） [目的与要求] 1.熟悉 菌落总数测定和大肠菌群检验所需的 各种培养基的制备。熟悉高压 蒸汽灭菌器的使用。 2.熟悉玻璃器皿的包装与干热灭菌方法。 [主要内容 ]： 1 研钵、剪刀、镊子、吸管、平皿的包扎与干热灭菌。 2 实验所需培养基（营养琼脂、实验所需培养基（营养琼脂、 EMB 琼脂、乳糖胆盐发酵管）和生理盐水 的配制、分装、包扎和高压蒸汽灭菌。 1）配制 700 mL 生理盐水（ 0.9%NaC0.9%NaC ），分别分装与5 个盐水瓶，每瓶 90 mL ；分装 18 支试管，每管 9 mL 。 2 ）配制乳糖胆盐培养基（发酵管）200 mL ，并分装于小试管各 3 mL ，每 管中加入一个充满培养基的小倒管， 注意一定不能有气泡。 （配方：2%蛋白 胨， 0.5%猪胆盐，1%乳糖，调 pH7.4 ，然后加入 0.4%溴甲酚紫 2.5ml/100m ） 3 ）配制普通琼脂培养基 400ML ，分装于 22 个三角瓶。（0.5%NaC ，1% 蛋白胨， 0.3%牛肉粉（膏），pH7.4 ，琼脂粉 1.5%） 4 ）配制伊红美蓝培养基 300 mL 。（配方：蛋白胨 1%，NaCl 0.5% ，牛肉膏 0.3%，pH7.4 ，琼脂粉 1.5%，加热溶化后加入乳糖 1%、2%伊红水溶液 2 mL/1000 mL 、0.65%美蓝 1 mL/1000mL） 5 ）TTC 培养基 （1）2%乳糖发酵管 40 支，每管 2.5m （2%乳糖， 2%蛋白胨）。 （2 ）TTC 培养液 100m （2%蛋白胨， 1%Nac ，1%Na2HPO4.12H2O,0.4% 十二烷基硫酸钠， PH7.4 ） （3 ）灭菌后 10%TTC8m 后分装于（ 1），每管 2.5m 。 6 ）DC 培养基（0.5%蛋白胨，0.5%Nac ，1%乳糖，0.3%K2HPO4.3H2O ， 0.2%柠檬酸铁铵，琼脂粉 0.7% ）溶于水后调 PH7.2 ，加入 10%去氧胆酸钠 1m 及 0.4%溴麝香草酚兰 1.6m 。 [思考题 ] 1 配制培养基时的一般原则和注意事项？ 2 使用高压灭菌器和恒温干燥箱的注意事项？ 食品营养与检测 南昌职业大学 体育卫生系 实验二 菌落总数测定（4个学时） [目的与要求] 通过本试验要求掌握食品的菌落总数测定的方法，菌落计数和报告方式， 以及 经常食用的各类动物性食品的菌落总数标准。 菌落总数是指食品检样经过适当处理， 在一定的条件下培养后， 所得 1g 或 1mL 检样中所含细菌菌落的总数，其也是判定食品被污染程度的标志。 [实验器材及试剂 ] 温箱、天平、灭菌试管、吸管、灭菌平皿、乳钵、剪子和镊子、稀释液、营养琼 脂、显微镜、载玻片、革兰氏染色液，等。 [实验内容 ] （一）检样稀释及培养： 1. 以无菌操作，将检样 2 5 g （或2 5mL ）剪碎放于含有 2 5 0 mL （或2 2 5 mLmL ）灭菌生理盐水或其他稀释液的灭菌玻璃瓶内 （瓶内预置适当数量的玻璃 珠） 或灭菌乳钵内， 经充分振摇或研磨作成 1： 10 的均匀稀释液。 2. 用 1mL 灭菌吸管，吸取 1：10 稀释液 1mL ，注入含有 9mL 灭菌生理盐 水的试管中振摇试管混合均匀，作成 1：100 倍稀释。 3. 另取 lmL 灭菌吸管，按（ 2 ）操作 10 倍递增稀释，如此每递增稀释一次换 一只