第4章细菌药敏试验及其耐药表型检测.pptVIP

* jhindler CLSI Taiwan Nov 08 * 内容总结 第4章 细菌药物敏感试验及其耐药表型检测。计算错误率：尽可能减少极重要误差 (假敏感率)。时间依赖型（％TMIC〕：β-内酰胺类，大环内酯类。用药剂量不同，服药的间隔不同。用无菌棉拭子蘸取菌液，在试管内壁旋转挤去多余菌液。不同的药判定标准不同。不同的菌判定标准也不同。该酶位于革兰阳性球菌菌体外，革兰阴性杆菌间质中。头孢他啶或头孢噻肟或头孢曲松或氨曲南MIC≥2mg /mL。平皿中心贴10μg 厄他培南或亚胺培南纸片。被测菌株与大肠埃希菌ATCC25922 抑菌环交汇处大肠埃希菌生长增强，即产碳青霉烯酶。SCCmec主要由mec复合物和ccr复合物两部分组成。菌落形态不典型（一些为微小菌落）。** 黄色色素 第八十一页，共八十一页。 AmpC酶的检测方法 头孢西丁三维试验是检测AmpC酶的经典方法； 除此之外，还有以硼酸化合物为抑制剂检测肺炎克雷伯菌和大肠埃希菌的AmpC酶、AmpC Disk、头孢西丁琼脂基础法等。 第四十九页，共八十一页。 碳青霉烯酶 碳青霉烯酶可以定义为具有水解碳青霉烯类抗生素活性的β-内酰胺酶，主要分布于β-内酰胺酶A、B、D类中。 根据水解机制中作用位点的不同可以将碳青霉烯酶分为两大类： 一类称为金属碳青霉烯酶，这类酶以金属锌离子为活性作用位点，可以被EDTA抑制，属于B类β-内酰胺酶； 另一类以丝氨酸（Ser）为酶的活性作用位点，可以被酶抑制剂克拉维酸和他唑巴坦所抑制，属于A、D类β-内酰胺酶。 第五十页，共八十一页。 碳青霉烯酶 A类酶 B类酶 D类酶 染色体编码：SME NMC IMI 质粒编码：KPC GES 质粒编码 OXA-23 OXA-24 OXA-51 OXA-58 OXA-55 OXA-48 OXA-50 OXA-60 OXA-62 金属酶，位于GMEs上，包括VIM，IMP，GIM，SPM，SIM等 可以被酶抑制剂抑制 可以被EDTA抑制 第五十一页，共八十一页。 碳青霉烯酶表型检测方法-改良hodge试验 ATCC25922，0.5麦氏，1:10稀释涂MH平板 平皿中心贴10μg 厄他培南或亚胺培南纸片 10μl环挑取3 ～ 5个菌落从平板中心纸片边缘向平板边缘划线 被测菌株与大肠埃希菌ATCC25922 抑菌环交汇处大肠埃希菌生长增强，即产碳青霉烯酶。 第五十二页，共八十一页。 改良hodge试验的结果判读 第五十三页，共八十一页。 金属酶表型检测方法：EDTA协同试验 用0.5麦氏单位的待测菌悬液涂布M H 平板。 贴IMP (10μg)纸片．距其1cm 处贴EDTA纸片（0.5mol/L 4μl）。 35℃ 过夜培养。 亚胺培南抑菌圈在靠近加EDTA纸片侧明显扩大者为产金属酶菌株。 亚胺培南 EDTA 10mm 第五十四页，共八十一页。 耐甲氧西林金黄色葡萄球菌（MRSA）携带SCCmec基因盒。SCCmec基因盒中的MecA基因编码修饰的青霉素结合蛋白PBP2a，这种蛋白对甲氧西林和其他的β-内酰胺类抗生素亲和力下降，从而导致对这些抗生素的耐药。 SCCmec主要由mec复合物和ccr复合物两部分组成。根据不同mec复合物和ccr复合物的组合，可以将SCCmec分成不同的型别，目前已发现8种SCCmec型。 耐甲氧西林葡萄球菌 第五十五页，共八十一页。 SCCmec基因盒 第五十六页，共八十一页。 耐甲氧西林葡萄球菌的检测 MRSA的检测方法有头孢西丁纸片扩散法、苯唑西林琼脂稀释法、乳胶凝胶试验检测PBP2a、mecA基因测定及MRSA显色培养基。 头孢西丁纸片法、苯唑西林琼脂稀释法是目前检测耐甲氧西林葡萄球菌最常用筛选方法。 对于金黄色葡萄球菌，MRSA的检测可以使用苯唑西林纸片，但对于凝固酶阴性葡萄球菌则不能使用苯唑西林纸片。 第五十七页，共八十一页。 甲氧西林耐药的葡萄球菌（MRS） MRS检测 药物 纸片法 稀释法 金黄色葡萄球菌 1mg 苯唑西林 √ √ 路邓葡萄球菌 1mg 苯唑西林 × √ 金黄色葡萄球菌和路邓葡萄球菌 30mg 头孢西丁 √ √ 除路邓以外的凝固酶阴性葡萄球菌 1mg 苯唑西林 × √ 30mg 头孢西丁 √ × 第五十八页，共八十一页。 凝固酶阴性葡萄球菌中苯唑西林MIC结果的报告策略* 苯唑西林 MIC (μg/ml) 进行 mecA 或 PBP2a 或 头孢西丁纸片扩散 ≤0.25 ≥4.0 0.5-2.0 报告苯唑西林敏感 报告苯唑西林耐药 阴性 阳性 报告苯唑西林敏感 报告苯唑西林耐药 *检测无菌部位感染的 非表皮葡萄球菌菌株 第五十九页，共八十一页。 克林霉素诱导耐药试