《本科生物传感器》.ppt

精选ppt 2）酶的比活力 每毫克蛋白质所含某酶的活力单位数称某酶的比活力． 3）酶浓度 每毫升酶蛋白溶液所含某酶的活力单位数称某酶浓度． 一定重量或一定体积酶制剂所具有的酶活力单位数叫做总活力．在酶的提纯过程中，总活力逐渐下降，比活力逐渐提高． 4）转换值 也称分子活力或摩尔活力．其定义是1摩尔酶在最适条件下，1min内所转化的底物的摩尔数．转化值的单位为min-1．转换值的倒数是一个催化循环所需要的时间． 酶的固定化技术 固定化酶使酶的利用率、稳定性与机械强度等方面均较可溶性酶有所提高，使用固定化酶为酶电极的制备提供了良好的条件. 1.惰性载体——物理吸附法 此法是酶分子通过极性键、氢键、疏水力或π电子相互作用等吸附于不溶性载体上． 常用的载体有：多孔玻璃、活性炭、氧化铝、石英砂、纤维素酯（包括硝酸纤维素、醋酸纤维素）、葡聚糖、琼脂精、聚氯乙烯、聚苯乙烯等. 已用此法固定化的酶如：脂肪酶、α－D葡萄糖苷酶、过氧化物酶等． 2.离子载体—交换法 选用具有离子交换剂的载体，在适宜的pH下，使酶分子与离子交换剂通过离子键结合起来，形成固定化酶．常用的带有离子交换剂的载体如下DEAE一纤维素、TEAE一纤维素、AE—纤维素、CM—纤维素、DEAE一葡萄糖、肌酸激酶等． 3．活化载体—共价结合法 a.重氮法 b.迭氮法 c.卤化氰法． d.缩合法 e.烷基化法 4.物理包埋法 此法是将酶分子包埋在凝胶的细微格子里制成固定化. 常用的凝胶有：聚丙烯酸胺、淀粉、明胶、聚乙烯醇、海藻酸钙、桂树脂等． 用凝胶包埋法制备的固定化酶如：木瓜蛋白酶、纤维素酶、乳酸脱氢酶等． 酶传感器 它将活性物质酶覆盖在电极表面,酶与被测的有机物或无机物反应,形成一种能被电极响应的物质。 例如,脲在尿素酶催化下发生反应 1967年Updick和Hicks将固定化的葡萄糖氧化酶膜结合在氧电极上,做成了第一支葡萄糖电极；此后,这类酶传感器通常是通过检测产物H2O2的浓度变化或氧的消耗量来检测底物。 葡萄糖电极缺点: (1)溶解氧的变化可能引起电极响应的波动; (2)由于氧的溶解度有限,当溶解氧贫乏时,响应电流明显下降而影响检测限; (3)传感器响应性能受溶液pH值和温度影响较大 第二代生物传感器,即介体型生物传感器,常用媒介体有铁氰化物、有机染料、醌及其衍生物、导电有机盐类和二茂铁及其衍生物。 最近,人们更关注酶与电极之间的直接电子传递研究,并用于构造第三代生物传感器 依据信号转换器的类型,酶传感器大致可分为酶电极(主要包括离子选择电极、气敏电极、氧化还原电极等电化学电极)、酶场效应晶体管传感器(FET-酶)和酶热敏电阻传感器等 3.2 组织传感器(TissueSensor) 组织传感器是以动植物组织薄片中的生物催化层与基础敏感膜电极结合而成,该催化层以酶为基础,基本原理与酶传感器相同. 与酶传感器比较，组织传感器具有如下优点： 1.酶活性较离析酶高. 2.酶的稳定性增大. 3.材料易于获得. 肝组织电极 动物肝组织中含有丰富的H2O2酶，可与氧电极组成测定H2O2及其它过氧化物的组织电极．1981年Mascini等研究了数种哺乳动物和其它动物（鸟、鱼、龟）的肝组织电极，翌年，报道了基于牛肝组织的H2O2电极． 牛肝-H2O2电极 取0.1mm厚牛肝一片，覆盖于氧电极的特氟隆膜上，用“O”型橡皮圈固定，即成牛肝组织电极． 在pH6.80的缓冲液中，使电极与空气中的氧平衡，然后加入底物，底物为浓度大于1O-5mol／L H2O2溶液．反应产生的氧气到达氧电极的特氟隆膜时，使电极输出增加．在1×10-4mol/L底物浓度时，1.5min即可获得稳定电流，如图所示： 若向溶液中通以氮气，以降低氧的溶解度，减少空气平衡溶液中氧的残余电流（约10μA）至十分之几微安，检测下限可降低至1X10-5mol／L，相关系数 R=0.997(n＝9) 植物组织膜电极结构图解 a一木瓜, b一果皮, c-中果皮,d-内果皮 1-中果皮组织薄片 2-固定化骨架 3-透气健, 4-垫圈 5-内电解质 6-复合PH电极 7-塑料电极体 3-7为二氧化碳气敏电极结构 3.3 微生物传感器(MicroorganismSensor) 微生物传感器分为两类： 一类是利用微生物在同化底物时消耗氧的呼吸作用；另一类是利用不同的微生物含有不同的酶。 好氧微生物在繁殖时需消耗大量的氧,可以氧浓度的变化来观察微生物与底物的反应情况。 装置是：由适合的