自然科学杂交技术.pptxVIP

会计学; 1.探针的概念： 在化学及生物学意义上的探针(Probe)，是指能与特定的靶分子发生特异性相互作用的分子，并可被特殊的方法所探知 核酸分子探针则是指带有标记物，能与互补核酸序列退火杂交的特定已知核酸片段。 探针的设计和选择影响核酸杂交实验结果的高度特异性、正确性。 ;2.探针的种类、选择及特点; 设计寡核苷酸探针遵循的原则： ①探针长度：一般要求10～50bP。过短则特异性降低，过长，则合成困难、杂交时间延长，亦会出现非特异性杂交 ② G：C碱基对含量应占40～60％；过少，则不易杂交，或杂交双链不稳定；过多，则会产生非特异性杂交 ③探针内部的互补碱基对不应大于4bP，否则会形成探针内部的“发夹”结构。 ;;;;放射性核素标记： 32P、35S、3H、125I、131I 优点是灵敏度极高，可以检测到10-14g ～10-18g物质； 缺点是对人体有一定影响，对环境有污染。;;固相杂交 膜上印迹杂交 细胞原位杂交 液相杂交 ;用印迹技术将凝胶电泳分离的核酸片段转移到特异的固相支持物上（转移后的核酸片段将保持其原来的相对位置不变）。 再用标记的核酸探针与固相支持物上的核酸片段进行杂交。 最后洗去未杂交的游离的探针分子，通过放射自显影等检测方法显示标记的探针的位置及量的多少。 ;1.印迹技术