DB33_ 3007-2015(2019)浙江省食品安全地方标准 食品中4-己基间苯二酚残留量的测定.docxVIP

DB33 DB33 浙 江 省 地 方 标 准 DB 33/ 3007—2015 食品安全地方标准 食品中 4-己基间苯二酚残留量的测定 2015 - 09 - 10 发布 2015 - 12 - 10 实施 浙江省卫生和计划生育委员会 发 布 DB DB33/ 3007 —2015 I I 前 言 本标准为首次发布。 本标准的附录A为资料性附录。 PAGE PAGE 1 食品安全地方标准 食品中 4-己基间苯二酚残留量的测定 范围 本标准规定了虾、蟹类水产品和果蔬中 4-己基间苯二酚（4-HR）残留量的高效液相色谱测定方法。本标准适用于虾、蟹类水产品和果蔬中 4-己基间苯二酚的测定。 原理 用乙腈-二氯甲烷溶液提取样品中4-己基间苯二酚，提取液经氨基固相萃取柱净化、浓缩，残渣用流动相溶解，液相色谱-荧光检测器检测，外标法定量。 试剂和材料 除非另有说明，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的一级水。 乙腈（CH3CN）：色谱纯。 二氯甲烷（CH2Cl2）。 甲醇（CH3OH）。 丙酮（CH3COCH3）。 正己烷（C6H14）。 乙腈水溶液（6+4，V/V）：量取 60 mL 乙腈（3.1）和 40 mL 水，混匀后备用。 甲醇-丙酮溶液（1+1，V/V）：量取 50 mL 甲醇和 50 mL 丙酮，混匀后备用。 乙腈-二氯甲烷溶液（7+3，V/V）：量取 70 mL 乙腈和 30 mL 二氯甲烷，混匀后备用。 4-己基间苯二酚标准品：CAS136-77-6，纯度大于 99.0%。 4-己基间苯二酚标准溶液：准确称取 100 mg（精确到 0.1 mg）的标准品于 100 mL 容量瓶中，用乙腈水溶液（3.6）溶解并定容至刻度，配制成浓度为 1 mg/mL 标准储备液，贮存于 0℃～4℃冰箱中密封保存，溶液有效期 1 个月。临用前，取此储备液，用乙腈水溶液（3.6）稀释成所需浓度的标准工作液。 氨基固相萃取柱：500 mg，3 mL，或相当者。使用前用 6 mL 甲醇丙酮溶液（3.7）和 6mL 正己烷活化。 微孔滤膜：0.45 μm，有机系。 氮气：纯度大于等于 99.9%。 仪器 高效液相色谱仪：配荧光检测器。 天平：感量 0.01 g。 分析天平：感量 0.000 1 g。 离心机：最大转速 10 000r/min。 旋涡混合器。 旋转蒸发仪。 固相萃取装置。 氮气吹干仪。 高速组织捣碎机。 操作方法 样品处理 试样制备和保存 从原始样品中取出代表性样品 500g，虾去头、去壳、去附肢，取可食部分；蟹去壳、去鳃等取可食部分；果蔬去皮。用组织捣碎机捣碎混匀，均分成两份分别装入洁净容器中作为试样，密封并标识。将试样放入-18 ℃以下保存。 制样和试样保存过程中，应防止试样受到污染或发生残留物含量的变化。 提取 称取 5 g（精确到 0.01 g）样品置于 50 mL 离心管中，加入 10 mL 乙腈二氯甲烷溶液（3.8），高速 组织捣碎机匀浆 2 min，盖塞，旋涡混匀 1 min，超声提取 10 min，8500 r/min 离心 5 min，取上清液转入 100 mL 旋转蒸发瓶中，重复上述操作一次。合并提取液于 45℃旋发至近干，取 7.5 mL 二氯甲烷分三次超声溶解，合并，待净化。 净化 将 5.1.2 中的待净化液转移至固相萃取柱（3.11）中。用 6 mL 正己烷淋洗，将固相萃取小柱抽至近干，用 6mL 甲醇丙酮溶液（3.7）洗脱，流速不超过 1 mL/min，收集洗脱液。洗脱液于 50℃用氮气吹干，残留物用 1.0 mL 流动相溶解，过微孔滤膜（3.12），供液相色谱测定。 样品测定 色谱条件 色谱柱：C18 柱，150 mm ×4.6mm （内径），5μm。 流动相：乙腈+水（6+4，V/V）。 流速：1.0 mL/min。 柱温：35℃。 激发波长：280 nm。 发射波长：310 nm。 进样量：10 μL。 标准工作曲线的绘制 用流动相将 4-己基间苯二酚标准溶液（3.10）稀释成为 0.05 μg/mL、0.50 μg/mL、2.0 μg/mL、5.0 μg/mL、 10.0 μg/mL、20.0 μg/mL、50μg/mL 系列标准工作液，供高效液相色谱分析。 色谱分析 分别注入 10 μL 4-己基间苯二酚标准工作溶液及样品溶液于液相色谱仪中，按 5.2.1 色谱条件进行分析，记录峰面积，响应值均应在仪器检测的线性范围之内。根据 4-己基间苯二酚标准品的保留时间定性，外标法定量。标准品色谱图见附录 A。 空白试验 除不加试样外，均按上述测定步骤进行。 结果计算 样品中4-己基间苯二酚的残留量按公式（1）计算，计算结果需扣除空白值。结果保留2位有效数字。 ?C - C0 ?