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2.液相色谱的固定相和流动相 (3) 凝胶和流动相的选择 凝胶的选择： ①亲水性高，表面惰性，即介质与溶质之间不发生任何化学或物理相互作用； ②稳定性强，在较宽的pH和离子强度范围以及化学试剂中保持稳定，使用寿命长； ③颗粒大小均匀，具有一定的孔径分布范围； ④机械强度高，允许较高的操作压力。 第四十七页，共七十六页，2022年，8月28日 2.液相色谱的固定相和流动相 功能 组别分离（脱盐）：分离大小两类不同的分子即无机盐与生物大分子； 分级分离：将分子大小相近的物质分开，通常为大分子间的分离。 大分子物质中除去小分子物质时，选用交联度大的型号；小分子物质与大分子物质分离，选择交联度小的型号。 第四十八页，共七十六页，2022年，8月28日 2.液相色谱的固定相和流动相 (4) 流动相 　 一般水溶性试样选择水溶液为流动相，而非水溶性试样则选择四氢呋喃、氯仿、甲苯等有机溶剂为流动相。 第四十九页，共七十六页，2022年，8月28日 3.经典液相柱色谱法 硅胶吸附柱色谱是较为常用的经典液-固吸附色谱，可用于分离极性至弱极性的化合物。 3.1 硅胶吸附柱色谱 使用时，一般需经过色谱柱制备、加样、洗脱和检出四个基本步骤。 第五十页，共七十六页，2022年，8月28日 3.经典液相柱色谱法 第五十一页，共七十六页，2022年，8月28日 3.经典液相柱色谱法 3.2 聚酰胺柱色谱 预处理 含有残留原料及溶剂，需水洗，丙酮、乙醇回流。干燥后研磨成细粉。 装柱 一般采用湿法装柱。 上样 洗涤和洗脱 第五十二页，共七十六页，2022年，8月28日 3.经典液相柱色谱法 3.3 离子交换柱色谱 树脂溶胀 用水浸泡直至上层液透明。 装柱 一般采用湿法装柱。 树脂处理与再生离子交换树脂通常使用酸、碱进行处理，可采用1~2?mol/L的盐酸及氢氧化钠溶液，以4~6倍树脂床体积交替进行处理，可获得最佳效果。在酸及碱处理之间须用去离子水洗至中性。 上样 洗涤和洗脱 第五十三页，共七十六页，2022年，8月28日 3.经典液相柱色谱法 3.4 凝胶柱色谱 凝胶溶胀 用溶剂浸泡入10倍的溶剂中。 装柱 湿法装柱。 平衡 加洗脱剂平衡。 上样 洗脱 第五十四页，共七十六页，2022年，8月28日 2.液相色谱的固定相和流动相 硅胶和氧化铝的含水量与活度的关系 活性级越大，含水量越多，吸附能力越小，活性越小 活性 ≠ 活度 吸附能力 吸水量 第十五页，共七十六页，2022年，8月28日 2.液相色谱的固定相和流动相 为高分子聚合物质，不溶于水、甲醇、乙醇等常用有机溶剂，对碱较稳定，对酸稳定性较差，可溶于浓盐酸、冰醋酸及甲酸。 ① 聚酰胺 3）常用有机吸附剂 第十六页，共七十六页，2022年，8月28日 2.液相色谱的固定相和流动相 聚酰胺对有机物质的吸附属于氢键吸附，通过分子中的酰胺羰基与酚类，或酰胺键上的游离氨基与醌类、脂肪羧酸上的羰基形成氢键缔合而产生吸附。吸附的强弱则取决与各种化合物与之形成氢键缔合的能力。 第十七页，共七十六页，2022年，8月28日 聚酰胺的吸附原理如图： 分离原理： 吸附强弱取决于：化合物与聚酰胺形成氢键的能力。 2.液相色谱的固定相和流动相 第十八页，共七十六页，2022年，8月28日 ① 形成氢键的基团越多，则吸附力越强； 聚酰胺对化合物的吸附力在水中有下列规律： 2.液相色谱的固定相和流动相 第十九页，共七十六页，2022年，8月28日 ② 易形成分子内氢键，则吸附力减弱； 2.液相色谱的固定相和流动相 第二十页，共七十六页，2022年，8月28日 ③ 芳香核、共轭双键多者吸附力大； 2.液相色谱的固定相和流动相 第二十一页，共七十六页，2022年，8月28日 2.液相色谱的固定相和流动相 聚酰胺“双重色谱”原理 正相色谱 非极性固定相（非极性脂肪链） 含水溶剂（甲醇-水，极性大） 苷（极性大）（柱色谱分离） 苷元 苷 极性固定相（极性酰胺基团） 有机溶剂（氯仿-甲醇，极性小） 游离黄酮（苷元，极性小） 苷元 苷 聚酰胺： 洗脱剂： 先洗脱： Rf值： 反相色谱 ④ 聚酰胺柱色谱属于双重色谱： 当流动相为水-醇系统时，其为反相色谱； 当流动相为氯仿-甲醇系统时，其为正相色谱。 第二十二页，共七十六页，2022年，8月28日 2.液相色谱的固定相和流动相 又称全多孔树脂，因其具多孔性结构而具筛选性，又通过表面吸附、表面电性或形成氢键而具吸附性。利用其对不同成分的选择性吸附和筛选作用，通过选用适宜的吸附和解吸条件借以分离、提纯某一或某一类有机化合物的技术