代谢物识别与结构鉴定.pptVIP

一、.联用技术 第五页，共三十九页，2022年，8月28日 联用技术 LC-MS LC-MS/MS GC-MS GC-MS/MS LC-NMR 第六页，共三十九页，2022年，8月28日 LC-MS联用技术 体内代谢物研究过程中，因待测物浓度太低，提取其纯品进行结构鉴定是不太可能的。应用LC-MS联用技术可获得复杂混合体中单一成分的质谱图，大大有利与药物代谢物的分离与鉴定。 第七页，共三十九页，2022年，8月28日 LC-MS联用技术 随着现代色谱联用技术的发展，体内多种微量代谢产物的分离、鉴定已成为一个连续过程，尤其是LC-MS样品前处理简单，一般不要求水解或衍生化处理，可直接用于药物及其I，Ⅱ相等极性较大代谢产物的同时分离、鉴定。运用LC-MS技术不仅可避免复杂烦琐的分离、纯化代谢产物的工作，而且可分离鉴定难以辨识的体内痕量代谢产物。 第八页，共三十九页，2022年，8月28日 LC-MS联用技术 四极质谱仪（QMS） 三重四极质谱仪（TQMS） 四极-线性离子阱质谱仪（QTrap） 四极-飞行时间质谱仪（Q-TOFMS） 离子阱-飞行时间质谱仪（IT-TOFMS） 代谢物鉴定中， 常用的与LC 联用的质谱仪器 第九页，共三十九页，2022年，8月28日 LC-MS特点 样品前处理简单，无需衍生化，适用范围广 将色谱的高分离能力与质谱的高检测灵敏度、定性专属性集于一身 随着接口装置和离子化技术的发展成熟，该技术在体内药物分析中逐渐发展成为一种常规的分离检测方法 第十页，共三十九页，2022年，8月28日 实例 大鼠尿中人参皂苷 Rd及 其代谢物的 LC-MS研究 第十一页，共三十九页，2022年，8月28日 LC-MS实例 目的：探讨人参皂苷 Rd在大鼠体内的代谢产物及转化途径。 方法：选择 SD大鼠 6只 ,单剂量口服和静脉给予人参皂苷 Rd,分段收集给药前和给药后 0～24 h尿样 ,将尿样分时段合并后采用旋转薄膜蒸发浓缩 ,以固相萃取小柱纯化处理 ,采用高效液相色谱 -串联飞行时间质谱进行检测。 结果：通过比较给药前后的 TOF总离子流图 ,对尿中推测的代谢物和标准物质的出峰时间及相关化合物选择离子扫描二级质谱图进行了比较分析 ,结果在尿中发现了 7种代谢产物 ,系统分析了这些代谢产物的代谢转化规律及可能结构。 结论：大鼠尿中人参皂苷 Rd的主要转化途径为氧化、水解、结合及异构化代谢反应。 第十二页，共三十九页，2022年，8月28日 离子源(ESI)电压: - 4 kV, 去簇电势(DP) :- 15 V, 聚焦电势( FP) : - 80 V, 去簇电势2 (DP2) :- 15 V, 雾化气(NEB ) : 0135 L ·min- 1 帘气(CUR) : 0120 L·min-1 负离子方式检测 采用TOF扫描一级质谱 扫描质量范围: 400～1 200 选择离子扫描二级质谱进行测定 色谱柱 流动相 其他 质谱条件 色谱与质谱条件 为甲醇(A) -10 mol·L - 1乙酸铵(B) 40 min内由体积比50∶50 线性梯度升至90 ∶10, 40 ～55 min 维持A∶B = 90∶10,等度洗脱15 min 流速: 018 mL·min-1 分流比为1 ∶60 柱温为25 ℃, 进样量为20μL Agilent Zorbax SBC18 (150 mm ×416 mm, 5 μm) Agilent Zorbax SB C18 (1215 mm ×211 mm)预柱 LC-MS实例 第十三页，共三十九页，2022年，8月28日 LC-MS实例 　Metabolization pathway of G-Rd 第十四页，共三十九页，2022年，8月28日 LC-MS实例 Fragment pathway of G-Rd 第十五页，共三十九页，2022年，8月28日 LC-MS/MS联用技术 由于多数药物的代谢物保留了原药分子的骨架结构，或一些亚结构，因此，代谢物可能进行与原药相似的裂解，丢失一些相同的中性碎片或形成一些相同的特征离子，用MS/MS分别进行中性丢失扫描、母离子扫描以及子离子扫描，即可迅速找到可能的代谢物，并鉴定出结构。 第十六页，共三十九页，2022年，8月28日 实例 LC-MS/MS 法快速高效检测尿液中尼古丁及其 9 种代谢物 第十七页，共三十九页，2022年，8月28日 LC-MS/MS实例 以氘代尼古丁、氘代可的宁、3-OH-氘代可的宁、氘代尼古丁葡萄糖醛酸复合物、氘代可的宁葡萄糖醛酸复合物、3-OH-氘代可的宁葡萄糖醛酸复合物作内标, 在 LC-MS/MS 的大气压化学电离(APCI)离子化模式下, 建立了快速检测吸烟者尿液中尼古丁及其 9 种代谢物