代谢控制育种.pptVIP

四、渗漏缺陷型在代谢调节育种的应用 渗漏缺陷型：遗传代谢障碍不完全的突变型 特点：酶活力下降，但不完全丧失，能在基本培养基上少量生长。 筛选方法： 营养缺陷型菌株 基本培养基 第三十页，共七十四页，2022年，8月28日 天冬氨酸 天冬氨酸半醛 高丝氨酸 苏氨酸 天冬酰胺 赖氨酸 高丝氨酸营养缺陷型菌株赖氨酸的合成途径 高丝氨酸脱氢酶 协同反馈抑制 高丝氨酸 脱氢酶活 力下降， 没有完全 丧失 第三十一页，共七十四页，2022年，8月28日 五、抗反馈调节突变株的选育 抗反馈调节突变株是一种解除合成代谢反馈调节机制的突变型菌株。 其特点是所需产物不断积累，不会因其浓度超量而终止生产。 “抗反馈抑制突变型” “抗阻遏突变型” Structure gene product Enzyme 调节中心 NO Regulatory gene protein product NO operator 第三十二页，共七十四页，2022年，8月28日 在实际应用中，解除反抗调节可由以下方面： 从遗传上解除反馈调节 各种抗性和耐性育种，回复突变子的应用 截流或减少终产物堆积 借助营养缺陷型或采用渗漏缺陷型 移去产物 借助膜透性突变 第三十三页，共七十四页，2022年，8月28日 抗反馈调节突变株获得途径 （一）回复突变引起的抗反馈调节突变株 （二）耐自身产物突变株选育 （三）抗终产物结构类似物突变株的选育 （四）累积前体和耐前体突变株的选育 第三十四页，共七十四页，2022年，8月28日 （一）回复突变引起抗反馈调节突变株 正向突变： 微生物从野生型经自然突变或人工诱变突变成有益突变型。 回复突变： 当具有突变型基因的个体通过再突变又变成野生型表型。 噬菌体敏感 野生型 噬菌体抗性 突变株 噬菌体敏感 野生型表型 前后表型同，但实质有区别 第三十五页，共七十四页，2022年，8月28日 1、回复突变的原因 （1）原有基因的回复突变 （2）非原有基因的回复突变 原有基因位点 消除 A基因 C基因 B基因 A C B A C B 原有基因不同位点 不同基因不同位点 基因内抑制突变 真正回复突变 抑制基因突变 第三十六页，共七十四页，2022年，8月28日 区别基因回复突变和抑制基因突变，可以将回复突变菌株和野生菌株进行回交试验或杂交重组试验来观察它们的子代是否有突变型出现： 杂交结果有同样的突变型重新出现，说明回复突变和原来突变型不在同一座位上而是分开的，属于抑制回复突变。反之，如果杂交后代没有产生突变型，表明回复突变的座位与原突变型基因位点相同，是真正的回复突变。 第三十七页，共七十四页，2022年，8月28日 回复突变的测定 回复突变常发生在遗传物质没有明显获得或缺失的点突变。 苏氨酸营 养缺陷型 基本培养基 第三十八页，共七十四页，2022年，8月28日 抗链霉素细菌的回复突变 依赖性突变株：抗链霉素突变株中有少数必须在有链霉素存在的时候才能生长。 诱变后 的菌株 含链霉素 含链霉素 不含链霉素 含链霉素 不含链霉素 依赖性突变株 第三十九页，共七十四页，2022年，8月28日 2、回复突变引起的抗反馈调节突变株的筛选 （1）初级代谢途径障碍性回复突变型 原养型 营缺型 原养型 诱变 诱变 酶活力恢复，但调节中心已发生改变， 不能与阻遏物结合，因此解除了反馈调节机制 第四十页，共七十四页，2022年，8月28日 5-磷酸核糖焦磷酸 次黄嘌呤核苷酸 琥珀酸腺核苷酸 腺核苷酸 酶活力恢复， 调节中心改变 鸟核苷酸 酶缺失 例： 黄嘌呤核苷酸 第四十一页，共七十四页，2022年，8月28日 （2）次级代谢途径障碍性回复突变 抗生素回复突变株 零变株：完全丧失产生抗生素的能力，但回复突变株的产量往往比亲株高。 原养型 营缺型 原养型 诱变 诱变 原养型 零变株 原养型 诱变 诱变 例如金霉素、链霉素 第四十二页，共七十四页，2022年，8月28日 一个共同的趋势：发生障碍性突变的营养缺陷型，抗生素产量都比亲株抵，而回复突变株往往比原养型亲株高。 营养缺陷型菌株中，几种不能合成的氨基酸与抗生素合成有关。基因突变的结果，使菌体丧失了合成这些氨基酸的某种酶的活力，导致抗生素产量 下降。 而回复突变导致合成氨基酸的酶的调节中心变化，氨基酸能大量合成。 抗生素大量合成。 分析原因 氨基酸 抗生素 第四十三页，共七十四页，2022年，8月28日 甲硫氨酸