植物组织培养实验之具体配置.pptxVIP

植物组织培养实验之具体配置会计学第1页/共30页实验一 培养基贮备液（母液）的配制目的与要求： 熟悉MS培养基的组成，掌握贮备液的配制方法.实验步骤： 称量 分别溶解 混合 定容。第2页/共30页一，MS培养基的组成1、大量成分→贮备液Img/L NH4NO3 1650 KNO3 1900 CaCl2 2H2O 440 MgSO4 7H2O 370 KH2PO4 170 配制20倍浓度贮备液500mL.第3页/共30页2、微量成分→贮备液IImg/L KI 0.83 H3BO3 6.2 MnSO4 4H2O 22.3 ZnSO4 7H2O 8.6 Na2MoO4 2H2O 0.25 CuSO4 5H2O 0.025 CoCl2 6H2O 0.025配制100倍浓度贮备液100mL.第4页/共30页3、铁→贮备液IIImg/L FeSO4 7H2O 27.8 Na2 EDTA 2H2O 37.3 4、有机成分→贮备液IVmg/L 肌醇 100 烟酸 0.5 盐酸硫胺素(VB1) 0.1 盐酸吡哆醇 0.5 甘氨酸 2 配制100倍浓度贮备液100mL.配制100倍浓度贮备液100mL.二，常用生长调节剂第5页/共30页6-BA：1mg/mL(溶于少量1N盐酸后以蒸馏水定容）。NAA:1mg/mL（先用少量95%乙醇溶解后以蒸馏水定容）。三、作业：第6页/共30页（一） 一般可将MS培养基分为哪四个部分？分别含有几种试剂？各种试剂的浓度（mg/L）如何？（二） 如需配制MS培养基的20×的贮备液I量为500 mL、100×的贮备液II、III和IV各100 mL以及BA和NAA（浓度为1 mg/mL）各50 mL，则应分别称取多少量的各种试剂？注意要点有哪些？第7页/共30页贮备液I(g)贮备液III(mg)MgSO47H2O3.70500mLFeSO4 7H2O 278 100mLNH4NO3 16.50Na2 EDTA 2H2O 373 CaCl22H2O4.40生长调节剂KNO319.006-BA50mg50mLKH2PO41.70NAA50mg50mL贮备液II(mg)贮备液IV(mg) KI 8.3 100mL肌醇 1000 100mLH3BO3 62 烟酸 5 MnSO4 4H2O 223 盐酸硫胺素 1 ZnSO4 7H2O 86 盐酸吡哆醇 5 Na2MoO4 2H2O 2.5 甘氨酸 20CuSO4 5H2O 0. 25 称量溶解 混合 定容CoCl2 6H2O 0. 25 第8页/共30页实验二 固体培养基的配制与灭菌 一、实验目的： 学习、掌握植物组织固体培养基的配制和灭菌方法。 二、实验步骤： 称量 混合 调pH值 灭菌第9页/共30页称量：按每瓶培养基终体积50mL计，称取适量的琼脂（常用量8g/L）和蔗糖（常用量30g/L），置于大烧杯中，加蒸馏水至需配培养基终体积的3/4左右，（加热）使之溶解。 混合：分别加入一定量的贮备液I、II、III、IV和生长调节物质及其它特殊补加物，再加蒸馏水直至需配培养基的终体积。调pH值：充分混合后，在60℃水浴条件下用0.1 mol/L的NaOH和0.1 mol/L的HCl调节培养基的pH值至5.8。 灭菌：封严培养容器口后，120 ℃灭菌20 min后，将培养基取出，置于水平台子上，在室温下冷却，备用。实验三 外植体材料的预处理、消毒及接种第10页/共30页一、实验目的： 熟悉外植体材料的预处理，掌握其消毒和接种方法。 二、方法步骤： 第11页/共30页 （一）对采来的植物材料进行适当的预处理。除去不需要的部分，将所需部分切割至适当大小，置自来水龙头下流水冲洗几分钟至几小时，主要视植物材料清洁程度而定。这在污染严重时特别有用。第12页/共30页 （二）用洗衣粉水（1~2角匙洗衣粉/100 ml水）等浸洗上述植物材料约5 min，再用自来水冲净洗衣粉水。这是进一步减少污染的处理。 同时配制消毒液：50%次氯酸钠溶液。第13页/共30页（三） 将接种用具、无菌水等从80℃烘箱中或直接从高压灭菌器中取出，置于超净工作台上。打开超净工作台中的紫外灯，在进行紫外线灭菌处理至少30 min后关掉紫外灯。第14页/共30页（四） 操作人员洗手擦干，换上洁净工作服，戴上帽子以免头发散落以及带来污染。坐到超净台前，并将装有经湿热灭菌培养基的培养瓶、配好的消毒液、洗净沥干的植物材料置于超净工作台上，用70%酒精棉球擦手与器