海洋微藻作为生物柴油生产的新型资源研究.pptVIP

海洋微藻作为生物柴油生产的新型资源研究 生物三组：欧安平、陶光吉、吴学民、潘剑洪 指导老师：黄勤妮 第一页，共二十五页。 1、绪论 生物柴油是一种发展潜力巨大的可再生能源，海洋微藻作为其原料生物具有资源丰富和产油量高等明显优势。本项目分离筛选到了13种海洋硅藻，对这些硅藻和另2种微藻的生长、总脂含量及脂肪酸进行了测定分析，发现硅藻的脂含量（占干重%）普遍较高，最高为三角褐指藻（36.2%）.以高产生物油为目标，最终筛选获得了生长快、总脂与饱和脂肪酸含量高、资源易得的4种赤潮硅藻（三角褐指藻、假微型海链藻、旋链角毛藻、热带骨条藻），它们是生物柴油生产的理想生物。三角褐指藻的热解产油试验得到了34.2%（占干重比例）的产油率，证实了利用海洋微藻生产生物油燃料的可行性及把赤潮硅藻化废为宝的优势，有明显的经济和社会价值与应用前景。 第二页，共二十五页。 2.1主要仪器与试剂 光照培养箱(宁波赛福PXX-280B)，旋转蒸发器(R206)，超声波细胞破碎仪(JY92-II),显微镜（Olympus BH-2），紫外分光光度计（UNICAM UV300），气相色谱仪(VARIAN CP3800) 氯仿、甲醇均用分析纯。 第三页，共二十五页。 2.2样品采集与藻种分离筛选 1.采样地点：主要采样地点包括厦门港、东山鲍鱼养殖区、舟山群岛水域、香港水域，除厦门港为自己取样外，其余样品均委托厦门大学生命学院硅藻实验室协助采集。 2.采集方法：样品采集包括采水和拖网两种。 3.分离方法：采用微细吸管分离法进行藻株分离。 第四页，共二十五页。 2.3 藻类培养与样品处理 实验前，在500ml锥形瓶(每个藻种取三个重复样)中进行藻种的扩大培养，在光照5000 lx，12 h:12 h下，用f/2培养液，20℃培养，在微藻指数生长期末期时进行收获。用Whatman玻璃纤维滤膜过滤收集藻泥，冷冻干燥，称重，于4℃中保存待用。 第五页，共二十五页。 2.4 藻类生长测定 从藻类扩大培养的第一天起至收集过滤藻液，每天或隔天取一部分藻液用紫外分光光度计测其OD值，以判断藻类的生长状况，并取实验结束时的藻液用鲁哥氏液固定，细胞计数时取0.1ml于浮游植物计数框在显微镜下进行，并计算藻细胞密度与OD值的比率，以确定生长期间藻细胞密度的变化。 第六页，共二十五页。 2.5 总脂测定 采用氯仿－甲醇(CHCL3-CH3OH)提取法。将冻干的滤膜剪成小片，分几次加入氯仿-甲醇(1:2)混合液振荡提取脂肪直至滤膜上藻体颜色变白，在所得氯仿－甲醇抽提液中加入蒸馏水使溶液最终比例为氯仿－甲醇－水（8:4:3）[10]。溶液分层后，取氯仿层即下层液体，倒入已知重量的旋转瓶中，用旋转蒸发器旋转蒸干，测出旋转瓶中剩余物质重量即为总脂重量。 第七页，共二十五页。 2.6 脂肪酸测定 脂肪酸的提取参考Lepage（1984）的方法略加修改[11]。将冻存的200mg带膜藻粉放入带盖的螺口试管①中，加入4ml CHCL3-CH3OH混合液（V/V=2：1），充N2一分钟后密闭封口；用超声波细胞破碎仪萃取30分钟（温度低于40℃，萃取时间分两次进行，间隔时间萃取液置于－20℃）；往带螺旋帽的水解管②加入0.3ml的内标溶液（0.2mg/ml），用N2吹干后，倒入螺口试管①萃取液，摇匀反应，接着用N2浓缩吹干后，加入2mol/L HCL-CH3OH溶液，充N2后密闭于100℃水浴中反应40分钟；冷却后用2ml正己烷分两次提取，合并提取液（正己烷层）于具塞离心管中，用N2吹至100μl左右，在气相色谱仪上进行脂肪酸测定。 第八页，共二十五页。 2.7 热解产油实验 把藻类接种于多个10升的三角瓶中扩大培养，同2.3 的方法和条件进行培养与样品收集、处理。取获得的藻粉在流化床反应器上进行快速热解，温度450℃，收集获得的热解液化产物和固体焦炭，分别称重，并计算产油率。 第九页，共二十五页。 3、实验结果3.1 藻种分离筛选 第十页，共二十五页。 3.2 不同藻类的生长 生长相对较快的藻种为三角褐指藻、自养小球藻、牟氏角毛藻、假微型海链藻和新月菱形藻。 不同藻种生长期间的OD值及其藻密度/OD比值 中文学名 天数 终藻密度（x103个·ml-1) 藻密度/OD比值 1 2 3 4 5 6 7 三角褐指藻 0.024 0.055 0.112 0.288 0.347 0.407 0.435 1536.4 细弱海链藻 0.003 0.018 0.020 0.034 0.058 0.063 0.089 78.1 881199 威氏海链藻 — 0.035 — 0.101 — 0.128 — 128.8 假微