WesternBlot快速实验攻略概要.docVIP

WesternBlot迅速实验攻略 一、WesternBlot实验原理 蛋白免疫印迹(WesternBlot,WB是将蛋白质经电泳分别后转移到膜上,而后利 用抗体进行检测的技术。完好的WB流程,以以下图所示,包括样本制备、SDS、转膜、抗体结合、蛋白检测等5 个大步骤。 二、试剂准备 各种缓冲液 1电泳缓冲液:10xTris-Glycine-SDS电泳缓冲液(20319ES762电转缓冲 液:WesternBlot电泳电转通用缓冲液(20329ES033蛋白上样缓冲液:5Xsds蛋白上样缓冲液(20315ES054其余缓冲液:PBS,TBST2.样本制备 1细胞裂解液:RIPA(20101ES60,或20115ES60,或20114ES602蛋白酶克制 剂:PMSF(20104ES033.蛋白定量 1蛋白定量试剂:BCA蛋白定量试剂盒(20201ES764.蛋白电泳 1预制胶:4-20%梯度预制胶,12孔(36214ES10 2蛋白marker:三色预染蛋白分子标准(10-245kDa(20352ES765.转膜与封闭1 膜(自备 2膜上蛋白检测:丽春红染色液(36221ES603膜的封闭:BSA,无IgG(36103ES25 抗体孵育 1抗体:内参抗体、一抗、二抗(例:30101ES10,30401ES10,34101ES60 2检测试剂:ECL化学发光超敏显色试剂盒(3620