植物总的提取与电泳.pptVIP

关于植物总的提取与电泳;1. 实验目的和要求 掌握RNA制备以及常用鉴定方法的原理、操作步骤、注意事项和技术关键。;2. 相关基础知识;由于RNase极稳定，所以，在操作RNA时，要格外仔细，以防RNA被降解。在提取RNA之前，必须对所用器皿进行RNase灭活处理。如用180oC干烤8小时以上处理玻璃器皿，或用0.1?的焦碳酸二乙酯(DEPC)的水溶液浸泡玻璃器皿和其它用品。所用水以及相关的缓冲液也需要用0.1? DEPC水处理，但Tris-Cl缓冲液等不可以用DEPC处理。 注意：DEPC有致癌之嫌 ，必须小心操作，防止接触与吸入 ！;植物细胞内的RNA主要是 rRNA（占80～85％）、tRNA及小分子RNA（占10～15％）和 mRNA（占1～5％）。rRNA含量最丰富，由25S、18S和5S几类组成。mRNA种类繁多，分子量从数百至数千碱基不等，但绝大多数mRNA在3’端都有一个polyA尾巴，因此，可根据此特性用寡聚脱氧胸苷(OligodT)层析柱从总RNA中将 mRNA分离出来。一般情况下，提取的总RNA也可用于Northern blot试验。;第六页，共二十四页，2022年，8月28日;提取植物RNA时，要注意的问题： 1）一般用机械研磨的方法破碎植物 组织细胞； 2）要加入蛋白质变性剂，使核蛋白 与RNA分离并释放出RNA； 3）抑制内源和外源